[发明专利]一种利用海藻酸钙法固定化植物乳杆菌发酵生产L-乳酸的方法

权利要求书

1.一种利用海藻酸钙法固定化植物乳杆菌发酵生产L-乳酸的方法，其特征在于发酵时，将增殖后的海藻酸钙法固定化细胞接入发酵培养基中进行发酵，一定时间取样，进行乳酸产量分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵培养基：玉米淀粉糖化液140 g/L、玉米浆75 g/L、碳酸钙30 g/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，固定化细胞增殖培养将固定化细胞按10%的接种量接入增殖培养基中，于37℃ 培养20 h；增殖培养完毕用无菌生理盐水洗涤3次，留作发酵。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，增殖培养基为：葡萄糖3% 、蛋白胨1% 、酵母膏1.5% 、K₂HPO 0.5% 、碳酸钙3% ，pH 6.0。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，细胞固定化方法采用海藻酸钙法，将菌种移入种子培养基，于37℃下静置培养20 h，取一定量菌液，离心10 min，收集菌体后加到海藻酸钠溶液中，再搅拌均匀，用注射器将此混合液滴人到CaCl₂溶液中，将形成的海藻酸钙凝胶珠置于4℃ 冰箱中，继续固化4 h。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于增殖时间为25 h。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，MRS种子培养基：葡萄糖20 g/L、蛋白胨10 g/L、牛肉膏10 g/L、酵母膏5 g/L、乙酸钠5 g/L、吐温80 1 mL、柠檬酸二铵2 g/L、K₂HPO₄ 2 g/L、MgSO₄·7H₂O 0.58 g/L、MnSO₄·4H₂O 0.25 g/L、灭菌前pH 6.5。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，海藻酸钠的浓度为1.5%。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于选择0.5 mm作为固定化颗粒直径。

10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于选择2.0%为氯化钙浓度。