[发明专利]一种通过发酵补料培养分批培养提高酶活力的方法

权利要求书

1. 一种通过发酵补料培养分批培养提高酶活力的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）种子培养：将诺卡氏菌用固体培养基在28 ℃培养箱中活化90-120 h, 挑接菌落于三角瓶中进行种子培养, 将三角瓶置于温度设定为28±2℃、转速为150-200 r/min 的摇床中培养48 h；

2）补料分批发酵：将5%种子液接种于发酵培养基中进行补料分批发酵培养，发酵条件为：发酵培养使用2.5L的自动控制发酵罐, 发酵体积为1.2 L,发酵温度28±2℃,搅拌转速150-200 r/min，通气量为35-40 L/min，pH值和溶解氧由发酵罐控制单元控制, 在发酵过程中，向发酵培养基中补加碱液和葡萄糖，满足菌体生长和腈水合酶合成营养的需要，延长菌体生长时间，培养40-50h后发酵结束，测菌体酶活。

2.根据权利要求书1种子培养基，其特征在于：固体培养基成分为：葡萄糖20 g/L、磷酸氢二钾0.5 g/L、酵母膏5g/L、蛋白胨5 g/L、硫酸镁0.1g/L、味精1g/L、磷酸氢二钾0.5g/L，尿素7g/L，琼脂20 g/L。

3.根据权利要求书1所述的一种通过发酵补料培养分批培养提高酶活力的方法，其特征在于：所述的发酵培养基成分为：葡萄糖25 g/L、酵母膏5 g/L、尿素8g/L、味精1.5 g/L、磷酸二氢钾0.8/L、磷酸氢二钾0.8 g/L、硫酸镁1.0g/L、消泡剂150ppm。

4.根据权利要求书1所述的一种通过发酵补料培养分批培养提高酶活力的方法，其特征在于：所述的碱液补加工艺为：当发酵液的pH小于6时，通过补加碱液使发酵液pH值维持在6.0-7.0。

5.根据权利要求书4所述的一种通过发酵补料培养分批培养提高酶活力的方法，其特征在于：所述的碱液为氢氧化钠或氨水，所述的pH值为6.5。

6.根据权利要求书5所述的一种通过发酵补料培养分批培养提高酶活力的方法，其特征在于：所述的碱液为氨水。

7.根据权利要求书1所述的一种通过发酵补料培养分批培养提高酶活力的方法，其特征在于：所述的补糖工艺为：在发酵中后期，通过补加150-180g/L的葡萄糖溶液使其浓度保持在6-15g/L。