[发明专利]重组人血管内皮抑制素脂质微泡及其在制备超声介导下抑制肿瘤血管生成的药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗肿瘤血管生成新制剂，具体而言，本发明制备一种重组人血管内皮抑制素的脂质微泡，能在超声辐照使载药微泡在肿瘤局部破裂释放药物，并且利用超声生物效应协同抑制肿瘤血管生成。

背景技术

血管内皮抑制素特异性作用于新生血管内皮细胞，抑制其生长和迁移，诱导凋亡，从而抑制血管生成。重组人血管内皮抑制素（recombinant human endostatin, rh-ES）在血管内皮抑制素N端添加了9个氨基酸，使蛋白质纯度、稳定性及生物活性均得到提高，已经应用于临床抗肿瘤。但由于rh-ES血浆半衰期短，临床上需要每日静脉注射给药，操作麻烦。同时，由于缺乏对肿瘤血管内皮细胞特异性，静脉注射后仅极少部分药物作用于肿瘤局部，疗效有限，并可能发生心血管系统不良反应。

超声波在生物组织传播时会产生热效应、空化效应、机械效应等，使血管壁通透性增高，血流速度加快，并且增加细胞膜的通透性，促进药物进入靶细胞内。超声微泡造影剂是一种良好的药物或基因载体，药物可通过包被、非共价结合、黏附于微泡表面或嵌入微泡膜中间等方式与微泡结合。联合应用微泡造影剂可增强超声辐照产生的生物效应，甚至使微血管破裂。 

目前研制的载药超声微泡粒径多在微米级水平，无法通过血管内皮间隙将药物直接运送到肿瘤细胞周围，难以达到真正的肿瘤靶向治疗。rh-ES作用的靶点是血管内皮细胞，制备成载药微泡静脉注射后，超声辐照可使通过血循环到达肿瘤局部的载药微泡破裂释放出药物，同时产生的生物效应可使肿瘤微血管破裂，微循环障碍，释放的药物更容易保留在肿瘤局部，直接作用于血管内皮细胞，发挥更强大的抗肿瘤血管生成作用，高效且安全。

发明内容

本发明的目的是提供一种重组人血管内皮抑制素的脂质微泡及其制备方法，重组人血管内皮抑制素的脂质微泡能在超声辐照使载药微泡在肿瘤局部破裂释放药物，并且利用超声生物效应协同抑制肿瘤血管生成。

本发明的另一目的是提供重组人血管内皮抑制素脂质微泡在制备超声介导下抑制肿瘤血管生成的药物中的应用。

本发明的目的是这样实现的，所述的重组人血管内皮抑制素脂质微泡，由下述方法制备获得的：将DSPE-PEG 2000-Biotin（二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素 ）、DSPC（二酰基磷脂酰胆碱 ）以摩尔比1:0.5-4分散于磷酸盐缓冲液；通入惰性气体，机械振荡后加入亲和素-抗生蛋白链菌素，抗生蛋白链菌素与DSPE-PEG2000-Biotin摩尔比为1:1-2，室温孵育；加入生物素化重组人血管内皮抑制素，所述亲和素与生物素化重组人血管内皮抑制素的摩尔比为1:1-2，室温孵育后制备得携重组人血管内皮抑制素脂质微泡。

生物素化重组人血管内皮抑制素的制备方法为：生物素-N-羟基琥珀酰亚胺酯（BNHS-ester）为美国Sigma公司产品，250mg装，分子量341.38，用二甲基亚砜配制成1mg/mL溶液配制。将BNHS-ester与重组人血管内皮抑制素按摩尔比15：3溶解于pH8.5的碳酸盐缓冲液，4℃孵育24h，24h后加入等体积谷氨酸终止反应，反应液经10000rpm超滤离心20min，洗涤3次，得生物素化重组人血管内皮抑制素。

本发明所述的重组人血管内皮抑制素脂质微泡在制备超声介导下抑制肿瘤血管生成的药物中的应用。

所述的肿瘤为乳腺癌、肝癌、头颈部肿瘤、胰腺癌、肾癌或前列腺癌。

本发明所述的重组人血管内皮抑制素脂质微泡的制备方法，包括如下步骤：将二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素与二酰基磷脂酰胆碱以摩尔比1:0.5-4分散于磷酸盐缓冲液；通入惰性气体，机械振荡后加入亲和素，亲和素与二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素的摩尔比为1:1-2，室温孵育；加入生物素化重组人血管内皮抑制素，所述亲和素与生物素化重组人血管内皮抑制素的摩尔比为1:1-2，室温孵育后制备得携重组人血管内皮抑制素脂质微泡。

所述的重组人血管内皮抑制素脂质微泡的制备方法，其特征在于亲和素为抗生蛋白链菌素。