[发明专利]一种预防奶牛乳腺炎的改进型增效核酸疫苗的构建

权利要求书

1.一种治疗和预防奶牛乳腺炎的改进型增效核酸疫苗。

2.根据权利要求1所述的核酸疫苗，其特征在于其优势抗原表位包含了本地区流行株FnBPA基因的A区和B区的核苷酸序列，克服不同来源的奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌产生的粘附附素造成的差异和提高其抗原针对性。该疫苗具有SEQNO2所示的碱基序列。

3.根据权利要求2所述的核酸疫苗，其特征在于其是一种融合基因，在FnBPA抗原表位基因的N端增加了牛IFN-γ的信号肽序列，在C端增加了牛源膜锚定型碱性磷酸酶的GPI信号序列组成融合基因。

4.根据权利要求3所述的核酸疫苗，其特征在于我们所述的融合基因位于真核表达载体PVAX-1中，此融合基因可位于任何真核表达载体中，包括但不限于PVAX-1，pcDNA3.1，pEGFP-N1，pEGFP-C1，pLXSN等载体。

5.根据权利要求4所述的核酸疫苗，还涉及所述核苷酸用于生产疫苗的用途

6.权利要求5所述的核酸疫苗的设计与构建方法，包括以下步骤：(A)为了在Fn的氨基端加入信号肽序列，根据奶牛IFN-γ信号肽cDNA序列合成引物，FnP1-5’TGC TCT GTGGGC TTT TGG GTT TTT CTG GTT CTT ATG GCA CTA ACG TTA ATC ATA TAG 3’FnP2-5’CGA gga tcc ATG AAA TAT ACA AGC TAT TTC TTA GCT TTA CTG CTC TGTGGG CTT TTG GGT TTT TC 3’FnR5’-GGA Tga att cTT CAA TGTATC CGT CAA C 3’并在上游引物引入BamH I、下游引物引入EcoR I两个酶切位点，利用延伸PCR方法将奶牛IFN-γ信号肽序列与FnBPA抗原表位基因融合。(B)为在抗原表位基因的羧基端加上加上牛源碱性磷酸酶的GPI信号序列，用引物GPIF-5’CCG GAA TTCT CAG CCA GCTCGT CCG GCA GCC CCT CCC CCG GCC CCC TGC TGC TCC TCC TGG CCC TGC TGCCCC TGG GCA GCC TGT TCT GAC TCG AGC GG-3’

GPIR-5’CCG CTC GAG TCA GAA CAG GCT GCC CAG GGG CAG CAG GGC CAG GAGGAG CAG CAG GGG GCC GGG GGA GGG GCT GCC GGA CGA GCT GGC TGA GAATTC CGG-3’。通过PCR反应将牛源碱性磷酸酶的GPI信号序列序列与上述构建的FnBPA融合基因相连接；(C)PCR产物经双酶切(上游引物引入BamH I、下游引物引入XholI两个酶切位点)后的产物连接入真核表达载体中；(D)在此以PVAX-1为出发载体，得到PVAX-SGFn质粒，测序并验证序列。

7.权利要求1所述的核酸疫苗的生产宿主细胞是大肠杆菌。