[发明专利]一种花椰菜的花药培养方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种花椰菜的花药培养方法。

背景技术

花椰菜( Brassica oleracea Var. botrytis)又名菜花，为我国秋冬主栽品种之一。因其食用部分粗纤维少，营养价值高，深受消费者的喜爱。利用不同生态型品种进行杂交，可以培育出新的花椰菜品种，具有很强的杂种优势。但花椰菜属十字花科异花授粉作物，自交衰退严重，自交不亲和系选育较困难，品种依靠群体杂合性保持稳定。而且培育杂交品种难度大。通过花药培养可以保特亲本的纯度稳定，加快杂种后代的选择效果。对于加快培育优良的椰菜品种具有很好的应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种花椰菜的花药培养方法。

本发明提供的一种花椰菜的花药培养方法，所述的培养方法包括以下步骤：（1）花药采集和消毒处理；（2）花药愈伤组织培养；（3）愈伤组织分化培养；（4）分化苗生根培养；（5）炼苗、假植、移栽。

所述的培养方法具体包括以下步骤：

（1）花药采集和消毒处理

①花药采集：在晴天上午取长度为3mm花药饱满的花蕾，经过镜检确定此时的花粉发育处于单核期或单核后期；

②花药消毒处理：花蕾经70％酒精浸泡30秒后，用0.1％升汞溶液消毒300分钟，然后用无菌水冲洗5次；

（2）花药愈伤组织培养

  ①诱导愈伤组织培养基：基础培养基E3+BA0.5mg/L+ NAA0.1 mg/L，

  培养基配制方法按常规操作。

  ②接种：取消毒过的花蕾，在无菌条件下用解剖针或镊子除去花瓣，以镊子夹住花丝，取出花药，花药直接均匀地接种于诱导愈伤组织培养基上，每200ml组培瓶中接3粒花药；

 ③培养：接种后置25±1℃暗培养7天，然后每天光照培养12小时，光照强度800勒克斯，相对湿度为65%；

（3）愈伤组织分化培养

 ①分化培养基：MS+0.5-1mg/L 6-BA + 0.5 mg/L NAA；

 ②愈伤组织块生长增大，并逐渐转为绿色，然后转入分化培养基进行培养；

 ③培养条件：温度25℃、湿度70%、光照强度1000～1500LX；

（ 4）分化苗生根培养

  ①生根培养基：1/2MS+0.1 mg/L NAA+活性碳0.2%；

②当苗长高到3～4厘米，长出3片叶时，接入生根培养基进行培养；

③培养条件：温度25℃、湿度70%、光照强度1500～2000LX；

（5）假植育苗

  ①炼苗：当苗基部长出根，长度达2cm时打开瓶盖，环境温度25℃，湿度控制在85%，光照强度2000LX，炼苗3～5天；

  ②假植：经炼苗后，移到塑料小盘中育苗，假植后环境温度25℃，湿度控制在90%，光照强度2000LX，成活后移大田栽培。

经过3～5代花药培养，使花椰菜后代趋于稳定，可作为花椰菜育种杂交亲本的材料。

本发明的优点：通过花药培养可以保特亲本的纯度稳定，加快杂种后代的选择效果。对于加快培育优良的椰菜品种具有很好的应用价值。

附图说明

图1为花药愈伤图。

图2为愈伤分化成幼苗。

图3为生根培养。

图4为假植苗。

具体实施方式

实施例1

1、花药采集和消毒处理

（1）花药采集：在晴天上午取长度为3mm左右花药饱满的花蕾作为实验材料，经过镜检确定此时的花粉发育处于单核期或单核后期。

（2）花药消毒处理：花蕾经70％洒精浸泡30秒后，用0.1％升汞溶液消毒300分钟，然后用无菌水冲洗5次。

2、接种培养花药愈伤组织

  （1）诱导愈伤组织培养基： E3*+BA0.5mg/L+ NAA0.1 mg/L。

  培养基配制方法按常规操作。

  （2）接种：取消毒过的花蕾，在无菌条件下用解剖针或镊子除去花瓣，以镊子夹住花丝，取出花药。花药直接均匀地接种于诱导愈伤组织培养基上（剔除花丝、瘪粒花药）每瓶（200组培瓶）中接3粒花药。

 （3）培养：接种后置25±1℃度暗培养7天，然后每天光照培养12小时，光照强度800勒克斯，相对湿度为65%左右。培养30～40天可见花药愈伤组织，如图1所示。