[发明专利]一种人肌钙蛋白I酶促化学发光免疫检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体提供了一种人肌钙蛋白I酶促化学发光免疫检测方法和试剂盒，适用于人肌钙蛋白I的酶促化学发光检测分析。

背景技术

人肌钙蛋白I（cTnI）是肌肉的主要调节蛋白质，直接参与钙所控制的肌肉收缩。它占肌原纤维蛋白的5%。钙从肌质网（sarcoplasmic reticulum）释放出来，与肌钙蛋白结合而结构发生改变，于是被抑制的肌动蛋白和肌球蛋白相互作用开始，而肌肉发生收缩。如果钙被除去，肌钙蛋白恢复原来状态，肌肉便发生松弛。肌心肌肌钙蛋白由肌钙蛋白T(TnT)、肌钙蛋白I(TnI)及肌钙蛋白C(TnC)三种亚单位组成。患有各种冠状动脉疾患的病人必然会发生心肌细胞损伤。有些病人的临床表现可能不完全符合WHO关于AMI诊断标准(不稳定心绞痛就是其中之一)，但却伴有某些心肌损伤标志物(如cTnT等)升高，从而导致细胞内的组成成分渗漏入外周血循环.这使得心肌细胞损伤标志物的检测成为可能.cTnT和cTnI在AMI后(3~6h)血中浓度很快升高，和CK-MB(3~8h)相当或稍早，它们测定的特异性和灵敏度明显高于CK-MB。cTn具有相当长的诊断窗口期(cTnI7~9天，cTnT更长)。cTn对急性胸痛病人(无论有无骨骼肌损伤)的诊断均优于CK-MB.研究表明:在对AMI的诊断方面cTnI和cTnT无显著差异，都能鉴别出CK-MB所不能检测出的心肌损伤。相对cTnT而言，cTnI显示出较低的初始灵敏性和较高的特异性.就上升的相对值来说，cTnT比cTnI高;在不稳定心绞痛病人中cTnT上升的频度比cTnI高.在AMI后30天死亡率的预报方面，cTnT优于cTnI.

目前人肌钙蛋白I的检测方法主要有酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）和胶体金免疫层析法（Gold-immunochromatography assay，GICA）。ELISA方法具有操作简单、技术可靠、试剂方便易得等优点，但其敏感性、特异性不够高，作为定量方法不够准确；GICA方法简便、快速、可单份或成批测定,但其灵敏度更低于ELISA方法，而且通常情况下只能做为定性方法，而不能作为定量方法。

化学发光(ChemiLuminescence，简称为CL)分析法是分子发光光谱分析法中的一类，其原理是在化学反应中生成的不稳定的激发态中间体，当其回到基态时，释放光子。化学发光分析法主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。在免疫检测分析中，使用化学发光技术，可以使检测的范围达到6个数量级，而且灵敏度很高，达10^-18摩尔水平，加上标记物稳定，有效期长，使其受到越来越多的关注与应用。

但目前尚没有利用化学发光分析法测量人肌钙蛋白I的研究和应用。

发明内容

为了进一步提高人肌钙蛋白I检测的敏感性、特异性和准确度，发明人将酶促化学发光分析方法应用于人肌钙蛋白I的检测中，经过大量的实验，摸索出一种灵敏、准确且稳定的检测方法，由此完成了本发明。

本发明一个方面涉及一种人肌钙蛋白I检测方法，其包括以下步骤：

（1）将抗人肌钙蛋白I抗体固定在固相表面，加入待测样本和标记的抗人肌钙蛋白I抗体，温育，然后用洗涤液洗涤；任选地，同时设立人肌钙蛋白I标准品的对照；

（2）加入化学发光底物工作液，放置一段时间；

（3）测量发光值，得到待测样本的人肌钙蛋白I浓度值。

其中步骤（1）中的温育为，在18-42℃条件下，优选为20-37℃条件下，温育5-120min，优选为温育10-60min，更优选为15-45min，在本发明的一个实施方案中，在37℃条件下，温育30min。

其中步骤（2）中的放置放一段时间是指1-30min,优选为2-20min。在本发明的一个实施方案中，放置时间为5min。

具体地，检测方法如下：

1．在固定有抗人肌钙蛋白I单克隆抗体的聚苯乙烯微孔板中加入5-100μL血清或血浆样本，标准品，混匀；加入5-100μL辣根过氧化物酶标记的抗人肌钙蛋白I单克隆抗体，37℃温育10-60分钟。在本发明的一个实施方案中，温育30min。