[发明专利]千层纸素A在制备治疗肺炎药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及千层纸素A在制备治疗肺炎药物中的应用，属于医药领域。

一、背景技术

千层纸素A(OroxylinA)是从木蝴蝶的种子中提取分离出来的一种黄酮类化合物，具有明显的抗菌活性，对痢疾杆菌、白喉杆菌、绿脓杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌以及脑膜炎球菌等均有抑制作用，最低抑菌浓度(MIC)在64-128μg/ml之间。但目前为止国内外未见千层纸素A用于治疗细菌性肺炎报道。

细菌性肺炎是由肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、军团菌等感染所引起的疾病，该病在儿童、老年人和免疫缺陷患者中病死率极高。近年来，抗生素的大量使用导致细菌耐药率增高，使得细菌性肺炎的治疗面临无药可治的局面。目前临床上以金黄色葡萄球菌所导致的肺炎病情较为严重，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)引起的肺炎病死率仍然较高。目前治疗金黄色葡萄球菌肺炎的药物通常使用苯唑西林和氯唑西林，但由于MRSA的出现，常常会导致治疗失败。因此，寻找新型、安全的治疗药物迫在眉睫。千层纸素A是来源于我国传统中药材黄芩、木蝴蝶等的成分，本发明研究证实了千层纸素A对细菌性肺炎，尤其是耐药性金黄色葡萄球菌引起的肺炎具有较好的治疗效果。

二、发明内容

千层纸素A的分子结构如下：

本发明通过兔红细胞溶血试验、人肺上皮细胞(A549)损伤的保护试验以及小鼠金葡菌肺炎模型证实其治疗金葡菌感染作用。

三、具体实施方式

1.溶血试验

纯化的α-溶血素于96孔板中作连续的二倍稀释，每个孔中加入10⁷个兔红细胞，于37℃中孵育30min后离心。使红细胞溶解的最高稀释倍数视为溶血滴度(Hemolysis titre)。

不加千层纸素A和加入不同浓度的千层纸素A后α-溶血素的溶血滴度如下表1：

表1.千层纸素A对α-溶血素溶血活性的抑制作用

千层纸素A(μg/ml) 溶血滴度(Hemolysis titre)0 20488 324 1282 2561 1024

2.人肺上皮细胞(A549)损伤的保护试验

金葡菌NCTC8325-4于TSB培养基中培养至OD_600nm＝0.5，取5ml的细菌培养物，离心并重悬于10ml的F12K培养基中。A549细胞于F12K培养基(加入10％胎牛血清)中于37℃，5％CO₂培养24小时后，以1.5×10⁴个细胞/孔铺于96孔细胞培养板中，每孔100μl。细胞贴壁后，加入100μl金葡菌悬液，并加入不同浓度的千层纸素A，置于细胞培养箱中于37℃，5％CO₂共培养8h。加入live(green)/dead(red)试剂，后于激光共聚焦显微镜(LSCM)下观察A549细胞的状态，活细胞显绿色，死细胞显红色。

结果表明，千层纸素A能够保护金葡菌α-溶血素介导的人肺上皮细胞(A549)损伤，该作用呈现剂量依赖性。

3.小鼠金葡菌肺炎的实验治疗学研究

3.1小鼠金葡菌肺炎模型