[发明专利]产低温乳糖酶的拉恩氏菌筛选及培养方法

权利要求书

1.一种产低温乳糖酶的拉恩氏菌筛选方法，包括以下步骤：

(1)初筛：吸取富集后的培养液用倍比稀释法制不同的稀释度移入初筛平板中，涂匀，15℃培养，筛选蓝色菌落，分离纯化，斜面保存。

(2)复筛：选取上限温度为40℃不生长的菌株为试验菌株。活化斜面保藏试验菌株，转接发酵培养基于15℃进行摇瓶培养(50mL/250mL)48h。提取粗酶液，测定15℃下水解活力，选取高酶活菌株Rahnella sp.R3为产低温乳糖酶的菌株。

2.一种利用产低温乳糖酶的拉恩氏菌制备产酶发酵液的方法，其特征在于：

(1)采用入权利1所述的产低温乳糖酶的Rahnella sp.R3为生产菌株；

(2)设定最佳发酵工艺：乳糖5％，蛋白胨1.5％，酵母浸膏1.0％，氯化钠0.3％，装液量为250mL三角瓶装50mL，培养基初始pH7.0±0.2；接种量4％，15℃，200r.min^-1发酵32h。

3.权利要求1所述的拉恩氏菌R3(Rahnella sp.R3)菌株具有以下特征：

(1)生长特征：菌株最适生长温度为15℃；最适生长pH为7

(2)菌体特征：革兰氏阴性，短杆菌，长度1.5μm～2μm，有荚膜，无芽孢。

(3)菌落特征：菌落呈黄色，圆形隆起，质地粘稠，边缘光滑，不透明，易挑取。

(4)生理生化特征：发酵D-葡萄糖产酸产气，明胶水解试验显阴性，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶及精氨酸双水解酶都呈阴性，硝酸盐还原、MR(甲基红)、VP(伏-普二氏试验)呈阳性。可发酵乳糖、麦芽糖、蔗糖、L-鼠李糖、棉籽糖、纤维素糖。