[发明专利]两形真杆菌制剂及其应用

说明书

本申请是分案申请，原申请日：2008年05月28日，原申请号：200810108889.X，原发明创造名称：凸腹真杆菌和两形真杆菌制剂及其应用。 

技术领域

本发明涉及凸腹真杆菌和两形真杆菌制剂及其应用，具体涉及凸腹真杆菌和两形真杆菌单独或组合作为主要活性成份制成微生态制剂，及该微生态制剂在治疗相关疾病中的应用，属于生物药领域。 

背景技术

目前，抗菌药在临床和养殖业等方面滥用的危害已引起重视，由于微生态制剂没有副作用，利用微生态制剂治疗相关疾病、保健及作为兽药和饲料添加剂已得到广泛应用。目前的微生态制剂主要成份包括双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等，治疗相关疾病疗效不是非常理想。丁酸(酪酸)已经被证实是结肠能量的首选来源，提供肠粘膜70％的能量，促进肠粘膜细胞增殖生长及消化系统发育成熟，同时丁酸也是调节免疫的重要物质。本发明微生态制剂进入肠道由于能够分泌大量酪酸，治疗相关疾病疗效显著，并可作为保健品、兽药和饲料添加剂应用，社会意义巨大，且未见相关研究报道，特申请此发明专利。 

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的微生态制剂，该微生态制剂中的主要活性成份进入肠道能产生大量丁酸，修复肠粘膜，调节免疫，抑制炎症因子过度表达，同时该微生态制剂还能恢复肠道菌群平衡和提高机体及粘膜免疫，有效治疗消化系统疾病、营养吸收障碍性疾病、自身免疫性疾病、心脑血管疾病、变态反应性疾病、手足口病及提高免疫和抗癌。其中所述消化系统疾病包括腹泻、肠易激综合征、冷凉泻、喝酒泻、溃疡性结肠炎、克罗恩病、抗生素相关性腹泻、伪膜性肠炎、小儿肺炎继发性腹泻、肠癌、肿瘤放化疗辅助治疗、腹胀和消化不良、便秘、便臭、便臭中毒综合征、肝胆疾病、病毒性腹泻、喂养不耐受、坏死性小肠结肠炎、黄疸、口腔溃疡、鹅口疮、促进小儿肠道发育成熟、 促进消化吸收、营养保健和生长发育；所述营养吸收障碍性疾病包括佝偻病；所述自身免疫性疾病包括类风湿性关节炎、强直性脊柱炎；所述心脑血管疾病包括高脂血症、高血压、脑血栓、脑栓塞、脑缺血、心肌梗塞、冠心病、脑梗死、脑出血、心绞痛、心肌炎、动脉粥样硬化；所述变态反应性疾病包括湿疹；所述提高免疫包括治疗反复呼吸道感染。 

本发明的微生态制剂的制备优选是通过下述步骤实施的，但不局限于此制备工艺，公知的能实现的制备工艺均可以：采取含凸腹真杆菌或两形真杆菌的样本，优选人或动物粪便，更优选健康婴儿粪便，然后将样品置于灭菌厌氧瓶内，吹入氮气同时充分混合，迅速从中取2克样品加入18mL灭菌的稀释液中，吹入氮气同时充分混匀，在无菌操作台内，进行10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，10^-5，10^-6，10^-7梯度稀释，取10^-5，10^-6，10^-7三个稀释梯度，分别涂布于凸腹真杆菌或两形真杆菌选择性单菌落分离固体培养基上，置于厌氧罐内，厌氧37℃下培养48小时，选择长势良好的单菌落分别接种于液体扩增培养基中，置于厌氧罐内，厌氧37℃下扩增培养48小时。将所得培养液离心(12000rpm)分离出菌体后，将菌体冷冻真空干燥，调制出各菌种的干燥菌粉，然后进行菌种鉴定、产丁酸实验和毒性试验，将鉴定的无毒性凸腹真杆菌或两形真杆菌干燥菌粉单独或组合按需要比例添加辅料制成片剂、胶囊和散剂等各种剂型或兽药、饲料添加剂。 

凸腹真杆菌或两形真杆菌选择性单菌落分离固体培养基优选但不局限于：纯化水100mL，胰蛋白胨1g，酵母浸膏0.5g，磷酸氢二钠0.4g，葡萄糖0.15g，可溶性淀粉0.05g，L-半胱氨酸0.02g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，琼脂1.5g，调pH值7.7，115℃，20分钟高压灭菌。灭菌后在冷却到60℃后加入5mL脱纤维马血，ES溶液4mL。 

其中ES溶液：丙酸钠30％，硫酸链霉素4％，硫酸巴龙霉素2％，硫酸多粘菌素B0.02％。