[发明专利]特异性识别玉米素的核酸适体及其筛选方法和应用

权利要求书

1.核酸适体，为序列表的序列1至序列8中任一所示的单链DNA片段。

2.核酸探针，为核酸探针甲、核酸探针乙、核酸探针丙或核酸探针丁，其特征在于：

所述核酸探针甲由单链DNA片段甲-1和单链DNA片段甲-2组成；所述单链DNA片段甲-1由序列表中序列1所示的核苷酸组成，且5′末端标记有荧光报告基团，3′末端标记有荧光淬灭基团；所述单链DNA片段甲-2由9-11个核苷酸组成，且能与序列表中序列1杂交；

所述核酸探针乙由单链DNA片段乙-1和单链DNA片段乙-2组成；所述单链DNA片段乙-1由序列表中序列1所示的核苷酸组成，且5′末端标记有荧光报告基团；所述单链DNA片段乙-2由9-11个核苷酸组成，能与序列表中序列1杂交，且3′末端具有荧光淬灭基团；

所述核酸探针丙由单链DNA片段丙-1和单链DNA片段丙-2组成；所述单链DNA片段丙-1由序列表中序列5所示核苷酸组成，且第21位的T标记有荧光报告基团；所述单链DNA片段丙-2由9或10个核苷酸组成，能与序列表中序列5第21-29位或第20-30位核苷酸杂交，且3′末端标记有荧光淬灭基团；

所述核酸探针丁由DNA片段丁组成；所述DNA片段丁为如下a1）或a2）：

a1）由序列表中序列5所示核苷酸组成，且第21位的T标记有荧光报告基团。

a2）由序列表中序列1-序列8中任一所示核苷酸组成，且5′末端标记有荧光报告基团。

3.根据权利要求2所述的核酸探针，其特征在于：所述单链DNA片段甲-2与所述单链DNA片段甲-1上任意连续的9-11个核苷酸反向互补；所述单链DNA片段乙-2与所述单链DNA片段乙-1上任意连续的9-11个核苷酸反向互补；所述单链DNA片段丙-2与所述单链DNA片段丙-1上任意连续的9或10个核苷酸反向互补。

4.根据权利要求3所述的核酸探针，其特征在于：所述单链DNA片段甲-2由序列表中序列9所示核苷酸组成；所述单链DNA片段乙-2由序列表中序列10所示核苷酸组成，且3′末端标记有荧光淬灭基团；所述单链DNA片段丙-2由序列表中序列11所示核苷酸组成，且3′末端标记有荧光淬灭基团。

5.含有权利要求1所述核酸适体、或权利要求2-4中任一所述核酸探针的试剂盒。

6.权利要求1所述核酸适体、或权利要求2-4中任一所述核酸探针，或权利要求5所述试剂盒在如下任一中的应用：

（1）鉴定或辅助鉴定玉米素；

（2）检测待测物质中玉米素浓度；

（3）分离和/或富集玉米素。

7.筛选权利要求1所述核酸适体的方法，包括如下步骤：

（a）以如下核酸文库为起始核酸文库：

5′-AAGGAGCAGCGTGGAGGATA(N₄₅)TTAGGGTGTGTCGTCGTGGT-3′，其中N为A、T、C或G；

（b）将所述起始核酸文库的溶液与固定有非靶标分子的微球孵育，分离去除与所述非靶标分子结合的核酸分子，保留与所述非靶标分子不结合的核酸文库溶液；

（c）将所述与非靶标分子不结合的核酸文库溶液与固定有靶标分子的微球孵育，分离得到与所述靶标分子特异结合的核酸分子；

（d）得到核酸适体；

所述靶标分子为玉米素分子；所述非靶标分子为如下物质中的至少一种：L-组氨酸分子、腺嘌呤、腺嘌呤核苷、一磷酸腺苷、三磷酸腺苷、乙醇胺和2-甲基烯丙醇。