[发明专利]包含颗粒佐剂和免疫增强剂组合的流感疫苗

说明书

本申请是2006.11.06提交的CN200680047609.8，题为“包含颗粒佐剂和免疫增强剂组合的流感疫苗”的分案申请。本文引用的所有文件全文纳入本文作为参考。

技术领域

本发明属于用佐剂配制疫苗来提供保护以抵御流感病毒感染的领域。

背景技术

除了希龙疫苗公司(Chiron Vaccines)的FLUAD^TM产品利用MF59水包油乳液佐剂外[1]，目前常规使用的流感疫苗不包含佐剂。参考文献2的第17和18章详细描述了这些疫苗。它们基于活病毒或灭活的病毒，灭活疫苗可以基于完整的病毒、“裂解”病毒或纯化的表面抗原(包括血凝素和神经氨酸酶)。血凝素(HA)是灭活流感疫苗的主要免疫原，参考HA水平标准化疫苗剂量，疫苗通常含有约15μgHA/毒株。

流感爆发期需要大量流感疫苗，但难以增加疫苗供应从而满足巨大的需求。因此，除了生产更多疫苗抗原，有人提出可以使用较低含量的抗原/毒株，同时使用佐剂来弥补减少的抗原剂量。还有人提出在流行间期采用相同的方案，从而例如能覆盖更多人群而无需提高生产水平。

有人提示可用不可溶的颗粒佐剂[3]，例如铝盐[4-7]或微粒[8]改进流感疫苗。虽然这些佐剂配制的疫苗是有用的，但仍有提高的空间。因此，本发明的目的是提供佐剂配制的其它改进流感疫苗(对于流行期和流行间期使用)和它们的制备方法。

发明内容

现已发现含有不可溶颗粒佐剂的流感疫苗能引发IgG应答，主要是TH2应答(IgG1)。通过在组合物中加入免疫增强剂可将该应答改变为TH1应答(IgG2a)。据报道，TH1型应答[9]能提高针对流感病毒的异源亚型(heterosubtypic)免疫力。有利的是，还发现免疫增强剂能提高血凝素滴度和抗-血凝素ELISA滴度。

因此，本发明提供包含(i)流感病毒抗原；(ii)不可溶的颗粒佐剂；和(iii)免疫增强剂的免疫原性组合物。

本发明还提供制备免疫原性组合物的方法，其包括混合(i)流感病毒抗原；(ii)不可溶的颗粒佐剂；和(iii)免疫增强剂的步骤。

本发明提供装有以下组分的试剂盒：(i)包含流感病毒抗原的第一试剂盒组分；和(ii)包含不可溶颗粒佐剂的第二试剂盒组分，其中(a)所述第一和第二组分包含免疫增强剂，或(b)所述试剂盒装有包含免疫增强剂的第三试剂盒组分。

流感病毒抗原

本发明组合物包含流感病毒抗原。通常可从流感病毒颗粒制备这些抗原，或者可在重组宿主(例如，利用杆状病毒载体的昆虫细胞)中表达诸如血凝素等抗原并以纯化形式使用[10、11]。然而，抗原一般来自病毒颗粒。

抗原可采用活病毒，或者更优选灭活病毒的形式。灭活病毒的化学方法包括用有效量的一种或多种以下试剂处理：洗涤剂、甲醛、福尔马林、β-丙内酯或紫外光。灭活的其它化学方法包括用亚甲基蓝、补骨脂素、羧基富勒烯(C60)或它们任何的组合处理。本领域知道灭活病毒的其它方法，例如二元乙胺(binary ethylamine)、乙酰基乙烯亚胺或γ射线。INFLEXAL^TM产品是完整的病毒颗粒灭活疫苗。

如果使用灭活病毒，疫苗可包含完整的病毒、裂解病毒或纯化的表面抗原(包含血凝素，通常还包含神经氨酸酶)。

可通过各种方法从含病毒的液体收集病毒颗粒。例如，纯化方法可包括利用线性蔗糖梯度溶液的区带离心，所述蔗糖溶液含有洗涤剂以使病毒颗粒破裂。任选稀释后，可通过渗滤纯化抗原。