[发明专利]猪瘟、猪伪狂犬病二联疫苗及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种猪瘟、猪伪狂犬病二联疫苗，其特征在于，所述二联疫苗包含至少一种猪瘟病毒抗原、至少一种猪伪狂犬病毒抗原。

2.根据权利要求1所述的二联疫苗，其特征在于，所述的猪瘟病毒抗原为猪瘟活病毒、改良/嵌合的猪瘟活病毒、至少含有猪瘟病毒的免疫原性氨基酸序列的重组病毒，至少含有猪瘟病毒的免疫原性氨基酸序列的多肽或成分的一种或任意几种的组合。

3.根据权利要求2所述的二联疫苗，其特征在于，所述的猪瘟病毒抗原为猪瘟兔化弱毒株。

4.根据权利要求2所述的二联疫苗，其特征在于，所述的猪瘟病毒抗原为猪瘟病毒E2亚单位抗原。

5.根据权利要求1所述的二联疫苗，其特征在于，所述的猪伪狂犬病毒抗原为猪伪狂犬活病毒、改良/嵌合的猪伪狂犬活病毒，至少含有猪伪狂犬病毒的免疫原性氨基酸序列的重组病毒、猪伪狂犬病毒基因缺失病毒或弱毒病毒的一种或任意几种的组合。

6.根据权利要求5所述的二联疫苗，其特征在于，所述的猪伪狂犬病毒抗原为伪狂犬病病毒基因缺失SA215株(CCTCC，保藏编号V200002)、Ea株(CGMCC，保藏编号N0.0907)、WKQ-001株(CCTCC，保藏号V200511)或伪狂犬病病毒弱毒株Bartha株、Bartha-K61株、Bucharest株、BUK株、H株(GCMCC，保藏号为No.5013)和C株(CCTCC，保藏编号V201114)的一种或任意几种的组合。

7.根据权利要求1所述的二联疫苗，其特征在于，所述的猪瘟病毒抗原为猪瘟兔化弱毒株，所述的猪瘟兔化弱毒株的含量为≥3.0×10^3.0TCID₅₀/头份，优选地为0.6～1.5×10^4.0TCID₅₀/头份，更优选的为1.0×10^4.0TCID₅₀/头份。

8.根据权利要求1所述的二联疫苗，其特征在于，所述的猪伪狂犬病毒抗原为猪伪狂犬病毒基因缺失株(SA215株)，含量为≥5.0×10^5.0TCID₅₀/头份，优选地为1.0×10^6.0TCID₅₀/头份。

9.根据权利要求1～8任意一项所述的二联疫苗，其特征在于，还包括冻干保护剂。

10.一种猪瘟、猪伪狂犬病二联疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：分别培养猪瘟病毒液和猪伪狂犬病毒液，获得猪瘟病毒液和猪伪狂犬病毒液，将猪瘟病毒液和猪伪狂犬病毒液按一定比例配制，制备成二联疫苗。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，将猪瘟病毒液和猪伪狂犬病毒液按如下比例配制，使得猪瘟病毒液的含量为1.0×10^4.0TCID₅₀/头份，猪伪狂犬病毒液的含量为1.0×10^6.0TCID₅₀/头份。

12.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，使用猪瘟E2蛋白代替培养猪瘟病毒液的步骤，并将猪瘟E2蛋白与培养的猪伪狂犬病毒液按如下比例配制，使得猪瘟E2蛋白的含量20μg/头份，猪伪狂犬病毒液的含量为1.0×10^6.0TCID₅₀/头份，制备成二联疫苗。

13.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述方法在将猪瘟病毒液和猪伪狂犬病毒液按一定比例配制之后，还包括加入冻干保护剂的步骤。

14.一种猪瘟、猪伪狂犬病二联疫苗的效力检验方法，其特征在于，所述方法采用间接免疫荧光方法，包括以下步骤：将病毒接种于细胞，待细胞长至单层后用丙酮溶液固定，然后加入一抗和二抗，最后根据荧光数计算疫苗效价。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述的细胞为传代细胞，更优选ST传代细胞；所述的固定用丙酮溶液优选80％浓度；所述的一抗优选猪抗猪瘟病毒血清；所述的二抗优选兔抗猪IgG(IgG-FITC)。

16.一种权利要求1-9任意一项所述的二联疫苗在治疗和预防猪瘟和猪伪狂犬病的疫苗中应用。