[发明专利]一种灵芝多糖的高效纯化技术

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种灵芝多糖的浓缩分离方法，得到的灵芝多糖纯度＞60％，产品可广泛应用与保健品、功能食品、生物医药等领域。

二、背景技术

灵芝(Ganoderma lucidum)是一种营养、保健价值极高的大型担子菌。自古以来，灵芝就被认为是吉祥、富贵、美好和长寿的象征，有“仙草”和“瑞草”之称，中华传统医学长期以来一直视之为滋补强身、固本扶正的珍贵中草药。迄今为止，我们已从灵芝中分离得到150多种化合物，可分为多糖类、三萜类、核苷类、呋喃类、生物碱类、氨基酸蛋白质类、甾醇类、无机离子、有机锗等十几类物质，多糖具有抗肿瘤生长，减少化疗毒副作用，镇静安神，提高机体免疫力，强心，降血脂血压，保护肝脏，降血糖，抗氧化及抗衰老等作用。大量研究报告显示：灵芝多糖是灵芝主要生物活性成分，灵芝的各种药效与灵芝多糖的活性和含量密切相关，而且灵芝多糖已经成为衡量灵芝产品质量优劣的最重要指标之一。

灵芝多糖是由肽多糖、葡萄糖、杂多糖等多糖均一体组成的混合物，是灵芝中的主要有效成分。现代医学研究表明灵芝多糖有许多重要的生理功能：(1)免疫调节功能；(2)抗肿瘤作用；(3)防止衰老；(4)降低血糖、血脂作用；(6)抗血栓抗血凝作用；(5)消除自由基等，在医药保健品开发等许多领域都具有广阔的开发前景，而且灵芝多糖的保健功能已经成为目前保健食品及药品的研究焦点。

灵芝多糖的纯化可以按分子大小和形状进行分级(如分级沉淀，分子筛等)，也可按分子所带电荷的性质进行分级(如电泳，离子交换层析等)。分级沉淀只能用来初步纯化，所制备样品纯度较低，而分子筛、电泳、离子交换层析等一般处理量少、浓缩时间长、成本高、不适合大规模工业化生产。自20世纪60年代研制成功高渗透性的膜后，超滤技术迅速发展起来并已成功的从实验室应用到大规模工业化生产，其目标物质收率高、生物活性保护好、能耗低，适于工业化生产。

三、发明内容

技术问题

本发明的目的是提供一种灵芝多糖的浓缩分离方法，该方法克服了蒸发浓缩和大量乙醇沉淀对多糖活性和大量有机溶剂引入的缺点。同时该方法简便，易得，灵芝多糖无毒、安全和高活性。所提取的灵芝多糖得率、纯度较高，可广泛应用与保健品、功能食品、生物医药等领域。

技术方案

灵芝多糖的浓缩分离方法，步骤如下：

①称取灵芝子实体粉，加入28倍纯水混匀，利用超声波细胞粉碎机，功率为680W提取17min，抽滤去除灵芝残渣；

②提取液经0.2μm微滤除去包含有机胶体、机械颗粒的杂质；

③微滤后的透过液进行超滤处理，料液用蠕动泵输送到超滤膜，膜的截留分子量为50kDa，膜面积为0.1m²，表面作切相流动，收集滤过液，截留液回流到储液罐中，当料液浓缩至四分之一体积时，结束超滤过程；超滤时，温度为35℃；操作压力：进口压力为0.82bar，出口压力为0.68bar。跨膜压差：ΔP为0.75bar；

④浓缩液用4倍体积乙醇沉淀，乙醇浓度为95％，冻干后称重，得一种灵芝多糖粗品，该灵芝多糖粗品的纯度为61.32％。

多糖含量的测定方法：

采用硫酸苯酚法，精密称取灵芝子实体粉2g，分别采用热水浸提和超声波提取工艺，抽滤去除滤渣，将滤液定溶到250ml容量瓶中，摇匀。精密吸取样液0.5ml，置15ml试管中，并用蒸馏水补至2ml，分别加入1ml6％苯酚和5ml浓硫酸，摇匀，30℃水浴20min，冷却后在490nm处测定吸光值A。以105℃下烘干至恒重的葡萄糖为标准品，制作标准曲线。

有益效果

本发明与传统的蒸发浓缩方法相比得到的灵芝多糖纯度高、时间短，并且有利于简化后续的纯化工艺，同时起到了浓缩和初步分离的作用。

在灵芝多糖的开发应用中，分离提取是最关键的步骤之一，它不仅影响着产品的纯度，还与产品的活性价值有着密切的相关性。目前多糖在制备过程中，大多通过蒸发方式对提取液进行浓缩，即便是采用真空浓缩，温度也要超过60℃，非真空蒸发方式温度更高，长时间加热不仅对产品感官品质有影响，而且对多糖生物活性也有影响。