[发明专利]产生无限克隆的慢性淋巴细胞白血病细胞的方法

权利要求书

1.产生无限克隆的慢性淋巴细胞白血病细胞的方法，其特征在于：包括下述步骤：

1）准备受过辐射的巨噬细胞分散在细胞培养器中； 

2）从慢性淋巴细胞白血病病人的血样中分离出外周血液单核细胞，将分离的外周血单个核细胞置于完全培养基中冲洗，冲洗后置于离心管中以1500RPM离心3分钟；

3）将离心后的外周血单个核细胞重新分散于完全培养基中形成2*10⁶个外周血单个核细胞/ml的完全培养基，该完全培养基包含50μg/ml的胰岛素-反义c-myb-硫代磷酸寡脱氧核苷酸和5μg/ml环孢菌素A；

4）向步骤3）的完全培养基中添加疱疹病毒悬浮液；

5）在含5%二氧化碳的恒温箱中，37℃下培养细胞4小时；

6）保温后，将疱疹病毒感染后的细胞以3500-4000个细胞/ml重新分散在包含有18μg/ml胰岛素-反义c-myb-硫代磷酸寡脱氧核苷酸的完全培养基中，然后分散于包含受过辐射的巨噬细胞的细胞培养器中；

7）在含5%二氧化碳的恒温箱中，37℃下培养细胞；

8）每周一次，从每格中取出100μl培养基，再添加100μl包含5μg/ml胰岛素-反义c-myb-硫代磷酸寡脱氧核苷酸的新鲜培养基；

9）在感染后2-4周，用ELISA收集细胞培养器中的抗体产品，然后用杂交瘤细胞融合法产生并克隆出源于慢性淋巴细胞白血病细胞的杂交瘤细胞株。

2.根据权利要求1所述的产生无限克隆的慢性淋巴细胞白血病细胞的方法，其特征在于：所述步骤1）中的巨噬细胞为J774A.1细胞。

3.根据权利要求1所述的产生无限克隆的慢性淋巴细胞白血病细胞的方法，其特征在于：所述步骤1）中受过辐射的辐射剂量为4200rad。

4.根据权利要求1所述的产生无限克隆的慢性淋巴细胞白血病细胞的方法，其特征在于：所述步骤9）中杂交瘤细胞融合法的具体步骤为：在感染后2-4周后，对HIV-1、丙型肝炎病毒和流感病毒结合和中和活性筛选抗体，选择呈阳性的细胞培养器中的细胞与杂交瘤细胞株融合，经有限稀释后获得杂交瘤细胞株。