[发明专利]一种用模式生物斑马鱼研究糖苷化合物川续断皂苷Ⅵ代谢的新方法

权利要求书

1.一种用模式生物斑马鱼研究糖苷化合物川续断皂苷VI脱糖基代谢的新方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取斑马鱼的成体鱼放入盛有水的容器里，分为空白溶剂组、空白鱼组、空白糖苷化合物组和糖苷化合物鱼组，空白鱼组和糖苷化合物鱼组斑马鱼数量相等，将受试糖苷化合物配成所需浓度，加入到糖苷化合物鱼组的水溶液中，空白鱼组加入等量的溶媒，空白溶剂组只加等量溶媒不放斑马鱼、空白糖苷化合物组加溶媒溶解的等量糖苷化合物不放斑马鱼，在糖苷化合物鱼组的斑马鱼暴露于药液后0h～48h，在不同时间点取鱼药液，于-70℃冰箱放置；在末次取鱼药液24h或48h时间点将鱼取出，用纯净水迅速洗涤2～3次，处死，去除鱼鳍和鱼磷，称重，于-70℃冰箱放置，空白溶剂组、空白鱼组和空白糖苷化合物组于0h、24h或48h时同法取样，备用；

(2)取步骤(1)得到的各时间点鱼药液冷冻干燥或用氮气、空气吹干，残渣加适量50％-100％甲醇或乙腈溶解，过0.45μm或0.22μm滤膜或15000转/min离心10～20min，取滤液或上清液进行高效液相色谱HPLC分析或高效液相色谱与质谱联用LC-MS分析；取24h或48h时间点斑马鱼鱼体剪碎，称重，匀浆，匀浆液加甲醇或乙腈除蛋白，3000～4000转/min离心10～20min取上清；上清液用氮气或空气吹干，残渣加50％～100％甲醇溶解，过0.45μm或0.22μm滤膜或约15000转/min离心10～20min，滤液或上清液进行HPLC分析或HPLC-MS分析。

2.根据权利要求1所述的用模式生物斑马鱼研究糖苷化合物代谢的新方法，其特征在于，

所述的高效液相色谱与质谱联用HPLC-MS分析条件为：

液相条件：规格为5μm，150mm×4.6mm的Agilent C₁₈柱和规格为4.6×12.5mm，ID5μm的C18预柱；柱温：25℃；流动相：A为0～0.1％甲酸水，B为0～0.1％甲酸乙腈，A十B＝100％，采用梯度洗脱：0～12min，25～27％B，12～30min，27～50％B，30～40min，50～80％B，40～45min，80～90％B，45～50min，90％B；流速：1.0mL/min；全波长扫描检测；记录时间50min；进样量为20μL；

质谱条件：毛细管电压2.50kV，锥孔电压35V，干燥气流速320L/h，离子源温度120℃，辅助气温度350℃；离子检测方式：全扫描检测，离子极性：正离子和负离子同时检测，离子化方式：气动辅助电喷雾离子化，扫描范围：100-1200m/z。

3.根据权利要求1所述的用模式生物斑马鱼研究糖苷化合物代谢的新方法，其特征在于，步骤(1)中糖苷化合物鱼组的斑马鱼暴露于药液后0h，3h，6h，9h，12h，18h，24h或48h时间点取鱼药液，在末次取药液时间点24h或48h时同时取鱼体。

4.根据权利要求1所述的用模式生物斑马鱼研究糖苷化合物川续断皂苷VI代谢的新方法，其特征在于，步骤(1)所述的溶媒为水或者是含有0～1％二甲基亚砜助溶剂的水溶液。

5.根据权利要求1所述的用模式生物斑马鱼研究糖苷化合物代谢的新方法，其特征在于，所述的糖苷化合物为川续断皂苷VI。