[发明专利]利用高压电晕电场对黄霉素产生菌进行诱变的方法及其装置

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种利用高压电晕电场对黄霉素产生菌进行诱变的方法及其装置。

背景技术

黄霉素(Flavomycin)又名默诺霉素(Moeno-mycin)、黄磷酯素(Flavophospolipl）、斑伯霉素(Bam-bermycin)，是德国赫斯特公司在20世纪70年代初期开发的一种新型抗生素类促生长剂。黄霉素主要由五个微生物活性物质组成，其中默诺霉素A为主要成分，此种抗生素通过真菌的厌氧发酵形成，存在于菌丝体中，可通过提取分离。对纯化后的抗生素进行理化分析表明，它是一种含磷的糖酯，不同于现有的任何一种抗生素。具有用量小、促生长效果显著，性能稳定，不与其它添加剂产生拮抗作用，不易产生耐药性，无污染、无残留、安全性高等特点。黄霉素在国外畜牧水产养殖业已得到普遍应用，而在我国的应用刚刚起步，科技工作者将紫外(UV)、微波物、离子注入剂和化学[9]诱变技术引进了诱变育种领域。为了提高黄霉素等微生物菌种的生产能力，应用合理的筛选程序及适当的筛选办法把优良的菌种选育出来，开发新的诱变方法为一个有益的尝试，我们用高压电晕电场作为新的诱变源对黄霉素产生菌进行了研究。

自从人们发现电场生物效应后，电场对生物体的影响成为了研究的热点，并且在许多领域得到了应用，电子束辐照可以对食物进行保鲜。电场处理能明显提高植物愈伤组织诱导率和分化率。而利用高压电晕电场对微生物进行诱变的方法尚未见报道。本试验用我们研究设计的针-板高压电晕电场处理装置，以出发菌08-28菌种进行电场诱变处理，以期得到性能稳定、优良高产的黄霉素生产菌种，从而证实高压电晕电场装置可以对微生物进行诱变。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种利用高压电晕电场对黄霉素产生菌进行诱变的方法及其装置。

本发明的技术方案如下：

一种利用高压电晕电场对黄霉素产生菌进行诱变的方法，诱变电压为21kV，针尖距离为8mm，诱变时间为4min。

所述的方法中采用的高压电晕电场装置，针尖间距为20mm，针板间距是25mm，针尖直径d＜0.01mm。

黄霉素产生菌08-28对电场很敏感，随着诱变剂量的增大菌种致死率也随之增大，诱变电压为21kV，针尖距离为8mm，诱变时间为4min时是最佳诱变剂量。经过电场诱变处理、筛选及传代培养得到了“诱变3号”菌株，其产黄霉素的能力相对原始菌株最高提高了1.92倍。说明高压电晕电场处理黄霉素产生菌有较好的诱变效果。

附图说明

图1为高压电晕电场实验装置；a：针尖间距；d：针板间距；A：电流表；V：电压表；

图2为负电晕放电的伏安特性；

图3为正电晕放电的伏安特性；

图4为极板间温度与电压的关系；

图5为诱变致死率曲线。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

1.材料和方法

1.1材料

1.1.1菌种 出发菌种：08-28(斑驳链霉菌S.bambergiensis)内蒙古中牧生物药业有限公司提供。

1.1.2试剂 黄霉素标准品(1mg相当于1395黄霉素单位)，中国兽医药品监察所；硫酸链霉素(650μg/mg)，进口；Ager，Japan；糊精、K₂HPO₄3H₂O，天津市风船化学试剂科技有限公司；FeSO₄·7H₂O、葡萄糖、MgSO₄·7H₂O，天津市四通化工厂；甲酸铵、蛋白胨、天津市光复精细化工研究所；酵母浸粉，北京奥博星生物技术责任有限公司；抗坏血酸，天津市化学试剂三厂；牛肉浸膏，天津市英博生化试剂有限公司；淀粉酶，北京双旋微生物培养基制品厂；Tris-Base，Sigma；以上试剂均为分析纯。甲醇(色谱纯)，天津市光复精细化工研究所；乙腈(色谱纯)，天津市永大化学试剂有限公司；大豆粉、玉米浆、玉米淀粉，市售。

1.1.3色谱柱 选用Agilent HC-C18色谱柱(250×4.6mm)。