[发明专利]一种白子菜蛋白提取物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

    本发明具体涉及一种白子菜蛋白提取物及其制备方法与应用，属于生物技术领域。

背景技术

白子菜（Gynura bicolor DC.）为菊科三七草属多年生草本植物，主要分布于我国南方各地。白子菜又称白背三七，近年来我国各地多有引种，主要用于糖尿病的辅助治疗，已公开的专利 200710084533.2，200610052502.4，201110372288.1均指出白子菜具有治疗糖尿病的作用。

动物试验证明，白子菜（白背三七）具有显著的降血糖作用（胡勇，李维林，林厚文, 等，白背三七地上部分降血糖作用研究，西南林学院学报，2007，27（1）：55-58；马正东，陈磊，宋洪涛，等，白背三七水提取物对 2型糖尿病大鼠的降血糖作用及其机制，中草药，2010，41（4），623-626），马正东等认为，白背三七对实验性 2 型糖尿病有较明显的治疗作用，其机制可能与增强机体清除活性氧的能力、减轻氧自由基对胰岛β细胞的损伤、 促进胰岛β细胞的修复等作用有关。

姜曼花等（姜曼花，胡剑卓，邱文高，等，白背三七多糖和黄酮降血糖及耐缺氧作用，中国医院药学杂志， 2009，29（13）：1074-1076）报道，白背三七多糖和黄酮可使四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖水平降低，血清胰岛素含量升高。

对白子菜化学成分的研究结果显示，白子菜主要含有黄酮类、生物碱类、萜类及甾体、长链脂肪族及烟酸、腺苷、尿苷等其它类型的化合物。白子菜中的黄酮类化合物有：槲皮素，3-O-β-D-吡喃葡萄糖槲皮素，芦丁，烟花苷，山柰酚，紫云英苷，山柰酚-3-O-(6′′-O-乙酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷，山柰酚-3,7-O-双-β-D-吡喃葡萄糖苷，均为常见化合物，而这些单体化合物均无特别显著的降血糖效果。白子菜所含的生物碱类物质主要有2-(1′,2′,3′,4′-四羟基丁基)-6-(2′′,3′′,4′′-三羟基丁基)-吡嗪，掌叶半夏碱庚，全缘千里光碱，光萼猪屎豆碱，吡咯里西啶，未见其在降血糖作用方面的研究报道。而萜类及甾体、长链脂肪族物质则多不具备明显的降血糖生物活性。因此仍需对白子菜降血糖活性成分进行更广泛和深入的研究。

α-葡萄糖苷酶专一性地催化含α-葡萄糖苷的蔗糖或麦芽糖水解，α-葡萄糖苷酶抑制剂可抑制小肠上段α-葡萄糖苷酶的活性，阻断碳水化合物分解成单个葡萄糖，从而降低糖尿病病人的餐后血糖。α-葡萄糖苷酶抑制剂作为一种作用独特的口服降糖药物，对于采用饮食控制及运动疗法效果不满意的 2 型糖尿病患者，可改善糖代谢紊乱，延迟或预防糖尿病慢性血管并发症的发生。

作为α- 葡萄糖苷酶抑制剂，西药的主要类型有阿卡波糖(Acarbose，卡博平、拜糖平)、伏格列波糖( Voglibose，倍欣) 、米格列醇( Miglitol) 等，目前以阿卡波糖在临床上应用最为广泛。本发明以阿卡波糖为阳性对照药，研究白子菜中降血糖的活性成分，所得提取物可作为辅助治疗糖尿病的保健品或药物而进一步研究开发。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种具有显著抑制α-葡萄糖苷酶活性、从而达到降血糖效果的白子菜蛋白提取物及其制备方法以及在保健品或药物制备方面的应用。

为了达到上述目的，本发明提供了一种白子菜蛋白提取物，以白子菜的新鲜叶片为原料，通过蛋白提取方法制备得到。

上述蛋白提取方法为采用用Tris-HCl缓冲液匀浆提取、硫酸铵盐析法沉淀。

Tris-HCl提取缓冲液浓度为20-100 mmol/L，pH 7.50-8.80；缓冲液中含有苯甲基磺酰氟（PMSF）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na₂）、二硫苏糖醇（DTT）、维生素C（Vc）和氯化钠（NaCl）；PMSF的浓度为0.01-1 mmol/L，PVP的质量百分浓度为0.1-1%，EDTA-Na₂的浓度为0.2-2 mmol/L，DTT的浓度为2-50 mmol/L，Vc的浓度为1-10mmol/L，NaCl的质量百分浓度为0.5-1%；缓冲液的加入量为每克白子菜新鲜叶片加入5-10毫升缓冲液。

硫酸铵盐析法沉淀为依次在硫酸铵的饱和度为20%、50%和80%下进行分级沉淀，分别得到0-20%饱和度的蛋白提取物、20-50%饱和度的蛋白提取物以及50-80%饱和度的蛋白提取物；0-20%饱和度的蛋白提取物或50-80%饱和度的蛋白提取物即为白子菜蛋白提取物。