[发明专利]一种油茶无性系组培外植体脱毒方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种油茶无性系组培外植体脱毒方法，具体是提供一种通过预处理及“多步式消毒法”获得大量油茶无性系无菌苗的方法。

背景技术

油茶（Camellia spp）是山茶科(Theacae)山茶属(Camellia)中种子含油量高、具有生产价值的油用物种的总称，是我国特有的优质木本油料树种，与油棕、椰子和油橄榄并称为世界四大木本油料树种（庄瑞林，中国油茶[M]，北京:中国林业出版社，1988）。我国现有油茶栽培面积4531万亩，主要分布于南方14个省（区），油茶种子榨取的茶油风味独特，营养丰富，脂肪酸组成合理，不饱和脂肪酸含量高达90%，油酸含量80%以上，不含人体难以吸收的芥酸和山俞酸，也不含会引起人体血压增高而导致血管硬化的胆固醇，油质优于橄榄油等其它食用油，是理想的食用油（陈永忠，杨小胡，彭邵锋，等，我国油茶良种选育研究现状及发展策略[J]，林业科技开发，2005，19（4）：1-4）。茶油的副产品茶枯和茶壳还可以通过综合利用提取茶皂素、磨制刨光粉和发酵高蛋白饲料等，油茶果壳可生产活性碳和提取鞣料等，所以通过深加工和综合利用可大幅度提高油茶产品的附加值。油茶适应性广、耐瘠薄，是南方低山、丘陵和岗地很好的经济林树种之一，不与粮、棉争地，而且还具有一年种植，多年受益的特点，丰产期长达80年，在我国南方农村经济和生态建设中占有很重要的地位（黎先胜，我国油茶资源的开发利用研究[J]，湖南科技学院学报，2005，26 (11)：127-129），发展油茶生产有利于缓解我国食用油长期依赖进口，供需紧张的矛盾，对提高我国国民经济和人民生活水平具有重大意义。

油茶种苗繁育主要采用播种育苗和芽苗砧嫁接法。过去油茶繁殖方法主要是播种育苗，后代分化严重，难以保持母株的优良性状，一般6~8年始果，产量高低不一。目前油茶种苗繁育主要采用无性繁殖方式—芽苗砧嫁接法，该方法技术难度大，嫁接成活率和合格苗出圃率均较低，出圃时间长达2年，造林成活率不稳定，造林成本高，林相整齐度差，苗木繁殖系数低，难以满足全国油茶产业发展对油茶优良无性系的需求，迫切需要研究油茶优良无性系高效组培快繁新技术。

组培快繁技术是一种广泛用于农业、林业的无性繁殖方法，具有繁殖速度快、方法简单、操作容易，材料消耗少，不受季节和地域限制的特点，同时子代能够保持母株的优良遗传特性。因此，研究油茶优良无性系组培快繁技术，对缓解油茶苗木紧张、加快油茶产业发展，缓解我国食用油紧张局面，推动农村经济和社会主义新农村建设具有重大战略意义。植物组织培养需经过初代、继代、生根、移栽四个阶段，得到完整植株。初代培养阶段无菌材料的获取是组培能否成功的关键，因植物材料表面常常带有各种微生物，而培养基营养全面，适合微生物生长，且接种后植物组织失去了表皮的保护，抵抗力不强，所以如果灭菌不彻底的话，微生物将迅速滋生，抑制甚至杀死植物组织细胞，使前功尽弃。

目前，对油茶组织培养外植体脱毒技术的研究很少，黄雅莉等研究了不同外植体消毒时间对油茶组织培养的影响，研究结果表明，HgCl₂消毒6min效果最好，油茶岑软2号与岑软3号的成活率分别达到71%与73%（黄雅莉，张日清，马锦林，等，油茶愈伤组织和芽诱导培养条件的筛选.经济林研究，2010，28（1）：30-34）。刘海龙等对油茶不同外植体的灭菌条件进行了研究，研究结果表明，以油茶种子、茎段为外植体，采用酒精、升汞、高锰酸钾3种灭菌剂，探讨不同处理对外植体污染和种子萌发的影响。结果表明，油茶茎段较好的灭菌方法:毛刷刷洗+75%酒精10~15s+0.1%HgCl₂10~15min，污染率最低为24.5%；新萌条较好的灭菌方法：75%酒精4~7s+0.1%HgCl₂5~6 min，污染率最低为14.3%；种子灭菌的条件：0.5%KMnO₄0~24 h+75%酒精3~15 min+0.1%HgCl₂20~40 min（不剥壳去皮），75%酒精30 s+0.1%HgCl₂ 8 min（剥壳去皮），这2种处理污染率均较低，种子发芽率相差不大（刘海龙，陈晓明，蔡玲，油茶不同外植体灭菌条件研究，广西林业科学，2010，39（2）：61-63，68）。毕方铖等用2.5%次氯酸钠、消毒时间20min对腋芽消毒效果最好，污染率为10%，芽的萌发诱导率为85%（毕方铖，谭晓风，张智俊，等，油茶离体培养诱导再生植株的研究[J].经济林研究，2004，22 (2) ：5-9）。