[发明专利]一种油茶无性系组培外植体脱毒方法

权利要求书

1.一种油茶无性系组培外植体脱毒方法，包括如下步骤：

（1）将油茶无性系组培外植体在0～10℃条件下进行低温预处理；

（2）将低温预处理后的油茶无性系组培外植体用乙醇消毒，冲洗，然后用HgCl₂处理；其中，所述的HgCl₂处理是分两次或两次以上对油茶无性系组培外植体进行间歇性处理，HgCl₂处理的总时间为4～20分钟，HgCl₂每处理一次后用水冲洗。

2.如权利要求1所述的脱毒方法，其特征在于，步骤（1）所述的低温预处理是将油茶无性系组培外植体放置于4℃恒温箱低温处理3-7天；步骤（2）是将低温处理后的油茶无性系组培外植体用体积百分比浓度75%的乙醇消毒10～15秒，无菌水冲洗3～4次，然后用质量百分比浓度0.1% 的HgCl₂处理2～10分钟，无菌水冲洗3～4次，然后再用质量百分比浓度0.1%的HgCl₂处理2～10分钟，无菌水冲洗6～8次。

3.如权利要求1所述的脱毒方法，其特征在于，还包括如下步骤：将经步骤（1）低温处理的油茶无性系组培外植体进行修剪，在质量百分比浓度0.1%的多菌灵溶液中浸泡2～4分钟，流水冲洗2～4小时，然后再进行步骤（2）的处理。

4.如权利要求1所述的脱毒方法，其特征在于，所述的油茶无性系组培外植体为当年生带芽枝条。

5.如权利要求4所述的脱毒方法，其特征在于，将经步骤（1）低温处理的带芽枝条取出后剪成一叶一芽的茎段，然后在质量百分比浓度0.1%的多菌灵溶液中浸泡2～4分钟，流水冲洗2～4小时，然后再进行步骤（2）的处理。

6.如权利要求1所述的脱毒方法，其特征在于，所述的油茶无性系组培外植体为当年生带叶枝条。

7.如权利要求6所述的脱毒方法，其特征在于，将经步骤（1）低温处理的带叶枝条取出后剪取叶片，将叶片在在质量百分比浓度0.1%的多菌灵溶液中浸泡2～4分钟，流水冲洗2～4小时，然后再进行步骤（2）的处理。

8.如权利要求1所述的脱毒方法，其特征在于，所述的油茶无性系组培外植体为未成熟果实。

9.如权利要求8所述的脱毒方法，其特征在于，将经步骤（1）低温处理的未成熟果实的种子取出，去掉外种皮，将种子用在质量百分比浓度0.1%的多菌灵溶液中浸泡2～4分钟，流水冲洗2～4小时，然后再进行步骤（2）的处理。

10.如权利要求5或7所述的脱毒方法，其特征在于，所述的步骤（1）低温处理是指在4℃恒温箱中水培。