[发明专利]一种以PDDA-Fe3O4纳米粒子为载体制备固定化葡萄糖氧化酶的方法

权利要求书

1.一种以PDDA-Fe₃O₄纳米粒子为载体制备固定化葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于包括以下步骤：1）以聚二烯丙基二甲基胺盐酸盐溶液、FeCl₃·6H₂O溶液和FeCl₂·4H₂O为原料制备PDDA-Fe₃O₄磁性纳米粒子；2）以PDDA-Fe₃O₄磁性纳米粒子为载体固定化葡萄糖氧化酶。

2.如权利要求1所述的一种以PDDA-Fe₃O₄纳米粒子为载体制备固定化葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于：所述的步骤1）采用二烯丙基二甲基胺盐酸盐溶液、FeCl₃·6H₂O溶液和FeCl₂·4H₂O为原料于三颈烧瓶中，搅拌下，缓慢滴加NaOH溶液，反应结束后，反应体系变为黑色悬浮液，静置一段时间，去除上清液，用蒸馏水反复洗涤至上清液无色后，置于烘箱中烘干，即得PDDA-Fe₃O₄磁性纳米粒子粉末。

3.如权利要求1或2所述的一种以PDDA-Fe₃O₄纳米粒子为载体制备固定化葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于：所述的二烯丙基二甲基胺盐酸盐溶液的质量浓度为3-5%；FeCl₃·6H₂O溶液的摩尔浓度为0.1-0.3mol/L；FeCl₂·4H₂O的摩尔浓度为0.05-0.15mol/L；且所述的二烯丙基二甲基胺盐酸盐溶液、FeCl₃·6H₂O溶液和FeCl₂·4H₂O的体积用量比为（5-15）：（35-45）：（35-45）。

4.如权利要求3所述的一种以PDDA-Fe₃O₄纳米粒子为载体制备固定化葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于：所述的二烯丙基二甲基胺盐酸盐溶液的质量浓度为4%；FeCl₃·6H₂O溶液的摩尔浓度为0.2mol/L；FeCl₂·4H₂O的摩尔浓度为0.1mol/L；且所述的二烯丙基二甲基胺盐酸盐溶液、FeCl₃·6H₂O溶液和FeCl₂·4H₂O的体积用量比为1：4：4。

5.如权利要求2所述的一种以PDDA-Fe₃O₄纳米粒子为载体制备固定化葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于：所述的步骤1）的反应温度为20-40℃，反应时间为20-40min。

6.如权利要求1所述的一种以PDDA-Fe₃O₄纳米粒子为载体制备固定化葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于：所述的步骤2）将步骤1）制备的PDDA-Fe₃O₄磁性纳米粒子粉末和酶液加入到pH=6的缓冲溶液中，混合均匀后，加入戊二醛溶液，充分交联；交联完成后，用离心机以9000r/min的转速离心5min，倒出离心液，用水冲洗附于离心管壁上的物质，再离心，倒去离心液，反复数次后，最终附于离心管壁上的物质即为固定化葡萄糖氧化酶。

7.如权利要求6所述的一种以PDDA-Fe₃O₄纳米粒子为载体制备固定化葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于：所述的PDDA-Fe₃O₄纳米粒子用量为0.05-0.15g；所述的pH=6的缓冲溶液采用0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1 mol/L柠檬酸溶液的混合溶液，用量为15-25mL；所述的酶采用葡萄糖氧化酶（葡萄糖氧化酶 Sigma 10000u）用量为0.3-2mg；所述的戊二醛用量为0.01-0.04mg。