[发明专利]一种快速测定生物样品中游离分析物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速分析生物样品的方法，特别涉及一种样品前处理、生物样品分析、血浆中药物蛋白结合率测定的分析方法，属于化学分析技术领域

背景技术

生物样品包括各种体液和组织，常用的是血液（血浆、血清、全血）、尿液、唾液。由于生物样品成分非常复杂，且一般具有生物活性，因此在常温条件下，样品在短时间内就会变质。鉴于此，生物样品分析前需要对活性物质进行复杂的预处理，如进行分离、纯化和浓缩。生物样品的分析方法多种多样，目前采用的主要方法包括：萃取、电泳、色谱等方法。由于萃取技术需要较长的萃取时间，对萃取剂要求很高，对于目标物质的定量也非常困难，因此萃取法对于生物样品的分析存在很大的缺陷；另外，电泳分析生物样品需要耗费很长的时间和很高的成本；虽然色谱方法比较常用，但其对样品的前处理要求也比较高。

复杂样品体系的分离、分析是现代分析科学中的重点和难点。随着现代科学技术的进步和分析技术、分析仪器的发展，分析的灵敏度、分辨率和自动化程度也越来越高，而费时费力的样品前处理技术已成为制约整个分析过程的瓶颈。因此，研究开发一种快速、高效、简单、绿色的样品前处理技术非常关键。

微萃取技术是上世纪九十年代发展起来的新型样品前处理技术，具有集采样、萃取、浓缩、分离于一体，简单方便，省时省力和绿色环保的特点。液相微萃取（LPME）由于其可选择的萃取相和萃取模式更多以及更为经济的特点，近年越来越受到国内外分析科学家重视。中空纤维液相微萃取（HF-LPME）利用多孔中空纤维膜来保护液体萃取相，具有成本低、有机溶剂用量少、样品净化功能突出、易与多种分析仪器联用和操作模式多样化等其它萃取技术无法替代的优点，是一种具有广阔发展前景的样品前处理技术，非常适合于血浆等复杂生物样品的分析。

虽然HF-LPME具有很多优点，然而，由于一般的定量方法需要在平衡状态下进行，其较长的萃取时间是HF-LPME最主要的方法缺陷。原因在于，对于生物样品分析而言，过长的萃取时间会影响游离药物和结合药物的平衡，进而会在生物样品的分析中产生一些假象而影响结果的准确度和精密度。此外，过长的分析时间可能导致萃取溶剂的损失，以及生物样品中酶的代谢等因素也会导致基质的改变。

另外，与传统的液液萃取（LLE）和固相萃取（SPE）不同，微萃取技术是一种非完全萃取的模式，因而定量校正技术对于微萃取技术的发展和应用十分重要。中空纤维液相微萃取一般采用平衡外标法定量，即利用标准溶液配制的样品溶液进行平衡萃取，再进行后续的仪器分析（色谱法或电泳法等），根据仪器的分析信号和已知的样品溶液浓度做出工作曲线。这种定量技术的缺点表现在：（1）平衡时间长（多数血浆样品的平衡时间是90-180分钟），样品会发生变化；（2）无法测定游离药物的浓度，外标法测定的只能是药物的总浓度（包括游离药物和结合药物），因而不能用于血浆样品中药物蛋白结合率的测定。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的是克服现有生物样品分析的难点，提供一种简单、快速、准确测定生物样品中游离分析物的方法。

本发明的目的是这样实现的：

一种快速测定生物样品中游离分析物的方法，包括样品前处理装置的制作、动力学校正中空纤维液相微萃取、样品中游离分析物浓度的计算和仪器分析，其中所述样品前处理采用动力学校正中空纤维液相微萃取技术，所述样品中游离分析物浓度采用动力学校正样品溶液中分析物浓度计算公式进行计算，所述仪器分析采用色谱质谱联用仪器进行定性定量分析。

优选地，所述的快速测定生物样品中游离分析物的方法，其中所述动力学校正中空纤维液相微萃取技术的样品前处理方法为中空纤维膜中的氘代分析物的脱附与分析物的萃取同时进行。

优选地，所述的快速测定生物样品中游离分析物的方法，其中所述中空纤维液相微萃取可选用手动或自动中空纤维液相微萃取进行处理，中空纤维膜材料根据分析物进行选择。

优选地，所述的快速测定生物样品中游离分析物的方法，其中采用的动力学校正样品溶液中游离分析物浓度计算公式可以进一步计算出血浆样品的药物蛋白结合率。

一种快速测定生物样品中游离分析物的方法，包括如下步骤：

a.取聚偏氟乙烯中空纤维膜，剪成1.6-2.0cm的小段，甲醇超声清洗，自然晾干；

b.取0.5-10μL的移液枪枪头剪去上半部分，留下2.6-3.0cm长度的尖嘴部分，其尖端套在步骤a的聚偏氟乙烯中空纤维膜上，聚偏氟乙烯中空纤维膜另一端被封口；