[发明专利]一种反义寡核苷酸

说明书

本申请是申请日为2007年5月18日的题为″用于诱导外显子跳跃的手段和方法″的中国专利申请No.200780018157.5的分案申请。

技术领域

本发明涉及寡核苷酸及其等同物以及将它们用于诱导外显子从mRNA中去除的应用。

背景技术

近年来，反义技术已经得到相当大的发展。反义技术的一般领域可分为若干方面。这些方面之一是外显子跳跃领域。

在该领域中，向细胞中加入小分子从而特异地干扰信使RNA(mRNA)的剪接，并且更具体地，干扰成熟的mRNA中的特定外显子的结合，或者更准确地说是成熟的mRNA中的特定外显子结合不足。

在外显子跳跃领域中，可以区分为两种一般方法。一种方法集中在干扰剪接(即，外显子序列的物理连接)的酶促过程。另一种方法依赖于干扰剪接过程的″逻辑学″(logistics)，即干扰通过剪接机制对外显子的识别。两种方法均使用小分子来获得所需的效果。该小分子都共有核酸分子能够″杂交″至互补序列的特性。这样的小分子的实例当然是RNA和DNA、以及修饰的RNA和DNA(如LNA和吗啉代化合物(morpholinos)、以及诸如PNA的核酸模拟物)。这些分子进一步被称为通用术语″小分子″或更加经常使用的术语″反义寡核苷酸(AON)″。

小分子被认为是通过杂交至pre-mRNA(前体mRNA)的特定位点而发挥作用的。杂交被认为干扰剪接的酶促过程或者外显子的识别。

目前，外显子跳跃集中在将一种或多种外显子从成熟的mRNA中特异性去除。然而，使剪接机制改变方向从而将其他的外显子包括在mRNA中也是可能的。例如，这种方法可应用在进行选择性剪接的基因中。在这些情形下，可将小分子设计为使剪接机制改变方向，以便更加有效地形成具体的可选择方案(specific alternative)。

发明内容

本发明提供一种反义寡核苷酸(AON)，包括表2中示出的序列或者由表2中示出的序列组成。

根据本发明的AON，在一种实施方式中，包括14-40个核苷酸或其类似物。

根据本发明的AON，在一种实施方式中，包括14-25个核苷酸或其类似物。

根据本发明的AON，在一种实施方式中，所述AON包括SEQ ID NO：118表示的h44AON4或者由SEQ ID NO：118表示的h44AON4组成。

根据本发明的AON，在一种实施方式中，所述AON是修饰的寡核苷酸。

根据本发明的AON，在一种实施方式中，所述AON包括至少一个核苷酸类似物。

根据本发明的AON，在一种实施方式中，所述AON包括选自2′-O-甲基核糖核苷酸、硫代膦酸酯骨架、吗啉代核苷酸、锁核酸(LNA)核苷酸、和/或乙撑桥联核酸(ENA)核苷酸中的一种或多种修饰。

根据本发明的AON，在一种实施方式中，所述AON包括一个或多个2′-O-甲基寡核糖核苷酸、硫代膦酸酯骨架、吗啉代寡核苷酸、锁核酸(LNA)寡核苷酸、和/或乙撑桥联核酸(ENA)寡核苷酸。

根据本发明的AON，在一种实施方式中，所述AON包括吗啉代磷酰二胺寡核苷酸。

根据本发明的AON，在一种实施方式中，所述AON包括一个或多个2′-O-甲基硫代膦酸酯核苷酸。

根据本发明的AON，在一种实施方式中，所述AON包括一个或多个2′-O-甲基硫代膦酸酯寡核苷酸。

根据本发明的AON，在一种实施方式中，包括全长硫代膦酸酯骨架，且其中，所有核苷酸包括2′-O-甲基修饰。

根据本发明的AON，在一种实施方式中，少于10％的核苷酸是核苷酸类似物。

本发明还提供了一种载体，表达上述AON或其前体。

根据本发明的载体，在一种实施方式中，其为病毒载体。

根据本发明的载体，在一种实施方式中，其为腺相关病毒载体。