[发明专利]白菜软腐菌HarpinEccs蛋白质与锌离子的络合方法和络合产物

说明书

所属技术领域

本发明属于生物基因工程领域，特别是涉及一种胡萝卜软腐欧氏杆菌Erwinia carotovora subsp.carotovora白菜软腐菌变种CSDS001菌株hrpN_Eccs基因及其基因产物，以及此基因通过生物技术方法提高植物多功能活性和广谱抗性并改良植物品质的应用。 

背景技术

植物长期以来在同周围各种生存和生长环境条件(包括生物的和非生物的)相互作用中实现了共进化，植物形成了一种共同的适应能力，这就是植物进化中形成的共同防御系统和生长系统，这是植物共有的一类防御机制和生长机制，并由多条信号通路和代谢途径来实现。研究表明，Harpin蛋白质作为植物的上游信号物质，与植物细胞壁中广泛存在的Harpin蛋白的受体，即Harpin结合蛋白(Harpin-binding proteins)HrBP结合并激活植物中的多条信号通路，这些信号通路的激活，将实现对植物细胞防御和生长多条代谢途径和机制的启动和调控，这就是Harpin蛋白质作为植物生长调节剂和生物农药的作用机制。 

Harpin_Eccs类蛋白质的作用机制正是基于对植物普遍存在的共性机制而发挥作用的，Harpin_Eccs类蛋白质作为上游信号物质，它们不能进入也无须进入植物细胞，不能够也不需要直接参与中下游多个细胞信号和多条信号通路的传导，更不直接参与中下游植物细胞防御和生长多条代谢途径和机制的启动和调控，Harpin_Eccs蛋白一旦与植物细胞表面的受体HrBP结合，在很短的时间内就会激活植物细胞中的多条信号通路，从而启动和调控植物的共同防御机制和生长机制。因此，Harpin类蛋白是一类能够诱导不同种类和不同品种的植物广谱抗性和促进生长发育的蛋白激发子，美国FAD在认证Harpin_Ea蛋白制剂时允 许它用于所有植物。 

但植物种类繁多，不同物种间、品种间生物学特性差异较大，内外环境也不同以及基因间互作的差异，不同来源和条件下获得的Harpin类蛋白质及其制剂的性质在使用条件和效果上存在明显的选择性差异。 

发明内容

鉴于现有技术的以上缺点，发明的目的是将Harpin_Eccs蛋白在合适的条件下与植物生长所需的锌离子发生络合，使其稳定性、功能活性和作用范围和效果得以改善。 

本发明的目的是通过如下的手段实现的。 

白菜软腐菌HarpinEccs蛋白质与锌离子的络合方法，HarpinEccs蛋白的原产生菌为胡萝卜软腐欧氏杆菌Erwinia carotovora subsp.carotovora白菜软腐菌变种CSDS001菌株，HarpinEccs蛋白质的氨基酸序列为SEQ ID.No1；络合过程和条件包含： 

(1)Harpin_Eccs蛋白质和硫酸锌的质量配比是：1∶1至6∶1之间；(2)反应浓度：Harpin_Eccs蛋白质和硫酸锌混合、稀释为含水量80％至60％；(3)反应PH和静置处理：调节PH到6-8，静置预处理时间0-1小时；(4)反应温度和时间：络合反应温度为30℃-40℃，络合处理时间1-2小时，络合反应时，反应混合液需要不断搅拌，搅拌速度为每分钟100-300转；(5)反应过程中，用EDTA法监测络合率，络合率保持稳定后，经红外光谱KBr测定，如果COO(-1)和NH3(+1)的伸展振动都向低波数位移，表明COO(-1)和NH3(+1)与加入的金属离子络合配位，作为完成络合物产物生成的指标；(6)反应完成后，进行低温真空连续干燥处理，最后收集络合产物，Harpin_Eccs蛋白质锌络合物。 

本发明的目的要在于获得一种白菜软腐菌Harpin_Eccs蛋白质与锌离子的络 合物，使其表现出稳定性更高，对高温、光照、酸碱具有更强的耐受性和耐储性；能诱导发生过敏反应的植物的种类更多；诱导植物的作用普遍表现出更强的抗病、防虫和其它抗逆性以及对供试植物生长发育的促进功能。