[发明专利]一种清毒安肾胶囊指纹图谱的建立方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于药物检测领域，涉及一种中药复方制剂指纹图谱的建立方法及其应用，具体涉及一种清毒安肾胶囊指纹图谱的建立方法及其应用。

背景技术

中药复方制剂是指将两味以上中药进行配伍组合并应用于疾病治疗的制剂。因其成分复杂，所以准确检测其各有效成分的难度很大。

中药指纹图谱系指中药，包括中药材、饮片、提取物或中成药经适当处理后，采取一定的分析手段得到的能够标示该中药主要化学成分特性的色谱图或光谱图，其具有特征性、整体性、半定量等特点，近年来已广泛应用于中药的分析和检测。

色谱质谱联用技术也是近年来发展迅速的一种高端分析技术，其中液相色谱质谱联用技术（LC-MS）是继气相色谱质谱联用技术（GC-MS）广泛应用后，逐渐被认识和接受的另一种联用检测技术。但由于其仪器价格昂贵，还未得到广泛应用。超高效液相色谱（UHPLC）-飞行时间质谱联用仪不仅能将中药复杂成分快速分离，而且其采用离子化技术，既能解决一些无紫外吸收成分的检测问题，还能够得到被离子化的成分的精确分子量，所以这种检测技术为中药复方制剂组成成分的结构鉴定和确认提供了很有价值的参考依据。

清毒安肾胶囊是丽珠集团自主研发的中药新药，主要用于治疗慢性肾功能衰竭、肾功能不全代偿期、氮质血症期和尿毒症早期。该药由黄芪、大黄等药材组成，具有健脾益肾、通腑降浊、活血化瘀之功效。自1996年起，已治疗早、中期慢性肾衰患者1000余例。该胶囊能显著降低血肌酐和尿素氮浓度、增加食欲和尿量、改善肾性贫血。

清毒安肾胶囊的药品标准中，鉴别项分别以（1）黄芪甲苷对照品；（2）淫羊藿苷对照品；（3）芍药苷对照品；（4）人参皂苷Rg1和Rb1对照品；（5）大黄对照品；（6）当归、川芎对照品，按照中国药典2010年版一部附录VIB进行薄层色谱法鉴别。含量项规定：按照中国药典2010版一部附录VID高效液相色谱法测定，其中每粒含芍药按芍药苷（C₂₃H₂₈O₁₁）计算，不得少于0.45mg；每粒含淫羊藿按淫羊藿苷（C₃₃H₄₀O₁₅）计算，不得少于0.15mg。

但是，现有的清毒安肾胶囊有效成分的检测方法还不够完善，尚不能全面、准确、有效地反映各种有效成分及其含量，不利于该产品的质量控制和临床应用，也不能明确地将清毒安肾胶囊与其他同类产品区分开来。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于弥补已有技术的不足之处，提供一种清毒安肾胶囊指纹图谱的建立方法，采用该方法获得指纹图谱具有检测准确性高、可靠的优点，能够快速、简便、全面、有效地显示清毒安肾胶囊的有效成分及其含量。

一方面，本发明提供一种清毒安肾胶囊指纹图谱的建立方法，该建立方法包括以下步骤：

（1）将清毒安肾胶囊的内容物溶于70%（体积比）的乙醇水溶液，制成浓度为5mg/ml的供试品溶液；

（2）采用高效液相色谱-质谱联用仪检测供试品溶液，获得总离子流图谱；其中，所述高效液相色谱检测采用C₁₈反相键合硅胶色谱柱，流动相1和流动相2进行梯度洗脱，并以电喷雾检测器检测，所述流动相1为0.1%（体积比）的甲酸水溶液，流动相2为0.1%（体积比）的甲酸乙腈溶液，按体积百分比计，所述洗脱梯度如下：

0-0.5分钟，流动相1为95%，流动相2为5%；

0.5-3分钟，流动相1由95%匀速变为80%，流动相2由5%匀速变为20%；

3-13分钟，流动相1由80%匀速变为60%，流动相2由20%匀速变为40%；

13-18分钟，流动相1由60%匀速变为0，流动相2由40%匀速变为100%；

18-20分钟，流动相1为0，流动相2为100%。

另一方面，本发明提供一种清毒安肾胶囊有效成分的检测方法，该检测方法包括以下步骤：

（1）将清毒安肾胶囊的内容物溶于70%（体积比）的乙醇水溶液，制成浓度为5mg/ml的供试品溶液；

（2）将芍药苷、淫羊藿苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷、大黄酸和大黄素溶于甲醇制备对照品溶液，各组分浓度均为0.02mg/ml；