[发明专利]毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测酱油中各种防腐剂含量的方法，尤其是一种毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法。

背景技术

酱油是一种富含营养、味道鲜美的调味品，受到微生物的污染时可能发生腐败变质，因此，生产厂家会添加一些食用防腐剂来抑制可能形成的腐败，在酱油中常用的防腐剂有苯甲酸、山梨酸以及对羟基苯甲酸酯类等。国家标准对防腐剂的限量作了明确规定，在安全使用范围内，防腐剂对人体无毒副作用，但过量食用对人体有一定毒性。目前有关的检测标准为GB/T 5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》和GB/T 5009.31-2003《食品中对羟基苯甲酸酯类的测定》 ，如果直接采用标准方法进行酱油中各种防腐剂含量的测定，一份样品要用两种方法分别进行预处理和采用不同的仪器条件，费时费力。而且经实践发现，在直接采用该标准对酱油类产品进行检测时，加标回收率较低，测定结果不稳定，并且在对较为浓稠的老抽类样品进行萃取时还容易因乳化现象的发生而难以分层进行后续操作。因此直接采用该标准中的气相色谱法对酱油类产品特别是老抽类样品进行检测时，精密度与准确度均不够理想，这是由于采用外标法定量，无论是样品处理还是仪器条件都可能导致误差的产生，繁琐的测定步骤增加了操作误差的发生几率，上机测定更是要求必须具有相当高的仪器性能与配置，例如需配置自动进样器来确保准确控制进样量等。

发明内容

为克服了现有技术的不足，本发明提供了一种毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，该方法可同时测定酱油中的苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸以及尼泊金酯类等防腐剂的含量，操作简便易行，能有效减少操作误差、以及仪器条件等因素对测定结果的影响，结果准确可靠。

本发明的目的是通过以下技术措施来实现：一种毛细管气相色谱内标法同时测定酱油中各种防腐剂含量的方法，其包括以下步骤：

(1) 称取酱油样品；

(2) 在样品中加入内标物溶液，然后依次进行酸化、乙醚提取，净化除水和浓缩处理，得到样品溶液；

(3) 取步骤(2)中的样品溶液进行气相色谱分析，获得色谱分析数据；

(4) 将步骤(3)的获得的色谱分析数据与各待测防腐剂的校正因子比对，得到酱油中各种防腐剂的含量。

本发明步骤(1)中可根据不同酱油类别称取所述的酱油样品的用量。作为本发明中的一个实施例，生抽类酱油推荐称取量在0.5~2.5g范围之间，而老抽类酱油推荐称取量在0.5~1.0g范围之间。

由于老抽类酱油采用乙醚提取时，易出现乳化，导致无法达到有效提取防腐剂的目的，因而在本发明所述的步骤(1)中如样品是老抽类酱油时，需对老抽类酱油进行预处理：在老抽类酱油样品中加入氯化钠溶液稀释1~2.5倍。

作为本发明的一种实施方式，所述的步骤(2)使用以下具体操作：将酱油样品置于具塞容器中，准确加入0.3~0.7ml内标溶液，再加入0.3~0.7ml盐酸溶液，混匀，用20~40ml乙醚分2次萃取，合并两次上层溶液，然后在所得的上层溶液中加入3~5ml硫酸氢钠溶液，振荡，进行洗涤净化，静置，移除下层溶液后向上层溶液中加入3~7g无水硫酸钠进行除水，然后40~45℃水浴上吹氮浓缩至0.1~1ml，再用2~2.5ml丙酮稀释，即成样品溶液。在酱油样品中加入盐酸酸化后，其中的苯甲酸钠、山梨酸钾等以盐的形式存在的防腐剂转化为有机酸，用乙醚进行萃取，再用硫酸氢钠洗涤净化去除残留的水溶性干扰组分，用无水硫酸钠吸除水，即可上机进行检测，简化了酱油样品预处理的过程，提高了工作效率，同时也减少了有机溶剂的使用。

本发明所述的具塞容器可以采用具塞量筒、具塞试管或比色管。

本发明所述的步骤(3)推荐的色谱条件为：所述的毛细管色谱柱采用极性毛细管色谱柱，要求能对各待测组分与内标物质同时实现良好分离；恒温或适当的程序升温均可；恒流或恒压均可，手动或自动进样0.5~1.0μl，载气为高纯氮气，柱头压0.05~1Mpa，分流比50~100﹕1。 

所述恒温的柱温约200~220℃。

所述的程序升温条件为：初温120~130℃，以5~20℃/min的升温速率升至200~210℃，再以3~6℃/min的升温速率升至220~230℃，保持3~5分钟。

所述的极性毛细管色谱柱可以采用HP-20M、DB-WAX或者PEG-20M等。