[发明专利]乳粉中核苷酸高效液相色谱测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种乳粉中核苷酸高效液相色谱测定方法，属于食品添加剂检测技术领域。

背景技术

核苷酸是一种营养素，对婴幼儿生长发育有重要作用，所以核苷酸可用于乳品添加剂。但是，人体对核苷酸的需求是有一定限度的，并非越多越好，乳品中核苷酸的含量必须加以控制。乳制品生产企业的乳粉标准中，把核苷酸的含量列为重要指标，所以对乳品中核苷酸的含量控制极为重要，这就需要相应的技术支持。目前报道的检测方法主要有微生物法、毛细管电泳法、高效液相色谱法等。其中高效液相色谱法分析速度快、效率高、灵敏度高，其应用最为广泛。

高效液相色谱法检测乳粉中核苷酸，测定前对试样必须进行处理，其中试样中蛋白质的分离至关重要。相关资料报导，试样处理时，普遍采用在试样溶液中加入一定量的醋酸或高氯酸使蛋白质沉淀，再分离除去，该方法经多次试验证明效果并不理想。试样溶液加入醋酸或高氯酸使蛋白质沉淀，但是蛋白质沉淀粘稠，溶液分层不清，有乳化层出现，难于过滤和洗涤，严重影响高效液相色谱法对核苷酸的测定，该分离方法不但干扰核苷酸组分中色谱峰的分离，而且严重影响核苷酸测定准确度。因此采用高效液相色谱法测定乳品中核苷酸时，如何使乳品中的蛋白质有效分离且不影响核苷酸含量测定的准确度，成为必须解决的技术难题。

发明内容

本发明的目的是提供一种乳粉中核苷酸高效液相色谱测定方法，其方法简单、操作方便、精确度高，蛋白质分离完全，排除了对核苷酸测定的干扰，为试样中核苷酸的测定提供了良好的条件。

本发明所述的乳粉中核苷酸高效液相色谱测定方法，包括如下步骤：

（1）用核苷酸标准品配制对照品溶液；

（2）称取乳粉试样，加蒸馏水于超声器中震荡溶解处理，使试样中核苷酸溶于蒸馏水；

（3）用硝酸调节试样溶液pH值为3~4，使试样溶液中蛋白质形成沉淀，过滤除去，滤液用水定容，作为供试品溶液；

（4）用高效液相色谱测定供试品溶液和对照品溶液核苷酸色谱峰面积；

（5）根据对照品溶液核苷酸浓度及其色谱峰面积，供试品溶液核苷酸色谱峰面积及试样质量，用外标法计算试样中核苷酸的含量。

步骤（2）所述的溶解处理时间为10~12分钟。

核苷酸含量计算公式如下所示：

Xi=Ai×Cs×ViAs×Mi×100---(1)]]>

式中：

X_i—试样中某种核苷酸含量，mg/100g；

A_i—供试品溶液核苷酸色谱峰面积；

A_s—对照品溶液核苷酸色谱峰面积；

C_s—对照品溶液核苷酸浓度，mg/ml；

M_i—称取试样质量，g。

试样中核苷酸总含量（mg/100g）计算公式如下所示：

X=∑X_i————————————    （2）

本发明的有益效果如下：

本发明提供的乳粉中核苷酸高效液相色谱测定方法，在试样处理中，用硝酸调节试样溶液pH值为3~4，使得蛋白质分离方法简单、分离彻底，排除了对核苷酸测定的干扰，乳粉中5种核苷酸：腺苷酸、尿苷酸、胞苷酸、肌苷酸和鸟苷酸均能得到良好得分离和准确定量，其准确度高、精密度高。5种核苷酸回收率平均值为97.76%，相对标准偏差为1.73%，符合定量分析方法的要求。本发明方法简单、操作方便、精确度高，蛋白质分离完全，排除了对核苷酸测定的干扰，为试样中核苷酸的测定提供了良好的条件，可以用于乳粉中核苷酸含量的测定。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步描述。

实施例1

乳粉中核苷酸含量检测：

1、核苷酸标准对照品溶液的配制：