[发明专利]肽选择方法

说明书

本申请是以下申请的分案申请：申请日：2001年8月17日；申请号：200910129672.1；发明名称：同上。

技术领域

本发明涉及一种用于选择耐受原性(tolerogenic)肽的方法、由该方法鉴定的肽，及其在疾病治疗和/或预防中的应用。本发明还涉及含有多种此类耐受原性肽的药物组合物。

背景技术

在适应性免疫应答中，T淋巴细胞能够识别蛋白抗原的内部表位。抗原呈递细胞(APC)摄取蛋白抗原，并将其降解成短肽段。肽与细胞内的I类或II类主要组织相容性复合体结合，并被运送到细胞表面。当该肽与MHC分子一同被呈递到细胞表面时能够被T细胞识别(通过T细胞受体(TCR))，此时，该肽可作为一种T细胞表位。

在对所有自身抗原或外源抗原的适应性免疫应答中，T细胞表位都具有主要作用。通过使用实验模型已证明了T细胞表位在过敏性疾病(包括变态反应、自身免疫疾病和移植排异)中的重要作用。用合成的肽(根据T细胞表位的结构)结合佐剂进行注射有可能引发炎性或变应性疾病。

反之，研究表明，将可溶形式的肽表位给药有可能导致针对特定肽表位的免疫耐受性。目前已证明，可溶性肽抗原给药可作为一种抑制疾病的有效方法，用于实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE——多发性硬化症(MS)的一种模型)(Metzler and Wraith(1993)Int.Immunol.5：1159-1165；Liu and Wraith(1995)Int.Immunol.7：1255-1263；Anderton and Wraith(1998)Eur.J.Immunol.28：1251-1261)；以及关节炎、糖尿病和色素层视网膜炎的实验模型(见上文Anderton and Wraith(1998)的综述)。此外还可作为进展性EAE疾病的治疗手段(上文Anderton and Wraith(1998))。

耐受原性肽在治疗或预防疾病中的用途已引起了相当大的关注。原因之一是已发现某些耐受原性表位能够下调T细胞对相同组织内不同抗原的应答。这种被称为“旁观者(bystander)抑制”的现象说明，利用特定的耐受原性肽有可能会诱导针对特定抗原内一种以上表位(优选的是所有表位)以及特定疾病中一种以上抗原的耐受性(上文Anderton and Wraith(1998))。这样就无需对特定疾病中的所有致病性抗原进行鉴定。

此外，肽是用于治疗的良好选择，因为其成本相对低廉，并且能够产生免疫学性质不同的肽类似物。这样就可以对肽进行修饰，以改变其与MHC或TCR的相互作用。

该方法可能存在的问题之一是，研究表明，并不是所有可充当T细胞表位的肽都能够诱导耐受性。免疫后的髓磷脂碱性蛋白(MBP)肽89-101是一种免疫优势抗原，并且从引发T细胞活性和诱导EAE方面来看都是一种非常有效的免疫原。但研究表明，当以溶液形式给药时，这种肽不能诱导耐受性(上文Anderton and Wraith(1998))。

在T细胞表位能够诱导耐受性方面，已针对观测到的分级结构提出了多种解释(见上文Anderton and Wraith(1998)的综述)。具体地说，有人认为肽对MHC的亲和力与其耐受原性之间存在相关性(上文Liu and Wraith(1995))，但该观点与一些观测结果不吻合。例如，MBP[89-101]能够以相对较高的亲和力与I-A^S结合，但不具有耐受原性。因而并不能直接预测哪些肽能够诱导耐受性。

如果有一种合理的解释来说明只有部分肽表位能够诱导耐受性，则有助于选择那些能够有效地用于治疗和预防过敏性病症的耐受原性肽。

发明概述

本发明人证明，如果一种肽表位具有不经抗原加工即可被未成熟APC呈递的适当大小，则这种肽表位能够诱导免疫耐受性。因此，一些T细胞表位具有耐受原性而其他T细胞表位不能诱导耐受性的观测结果可由以下事实来加以解释，即某些表位需经过进一步加工，然后才能够被MHC分子呈递。这些需要进一步加工的表位尽管与佐剂协同注射时能够诱导疾病，但是以可溶形式给药时不能诱导耐受性。

不需要进一步加工的表位则能够诱导耐受性，本发明人将其命名为“apitopes”(抗原加工非依赖性表位)。