[发明专利]一种重组人胱抑素C编码基因与表达方法

权利要求书

1.一种重组人胱抑素C编码基因，其核苷酸序列见SEQ ID NO：1。

2.重组人胱抑素C蛋白的表达方法，包括如下步骤：

1)将权利要求1所述的重组人胱抑素C编码基因（目的基因）插入到原核表达载体的多克隆位点，构建重组表达质粒，将重组表达质粒转化到表达宿主菌大肠杆菌，筛选出阳性克隆菌，得工程菌；

2)工程菌经发酵、诱导、分离、纯化，得重组人胱抑素C蛋白。

3.根据权利要求2所述的重组人胱抑素C蛋白的表达方法，其特征在于：步骤2）工程菌经发酵培养、IPTG诱导表达融合蛋白、收集菌体，破碎菌体，收集上清液，上清液经镍层析柱纯化，得重组人胱抑素C蛋白。

4.根据权利要求3所述的重组人胱抑素C蛋白的表达方法，其特征在于：IPTG诱导表达融合蛋白的方法：待发酵培养的菌液OD_600nm在0.6～1.0，加入终浓度0.1～10  mmol/L的IPTG， 30～40℃培养2～10 h。

5.根据权利要求2所述的重组人胱抑素C蛋白的表达方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

1)将目的基因的两端加入酶切位点，进行全序列合成，得合成基因序列；

2)将合成基因序列克隆于T载体，测序确定成功构建重组T载体；

3)将目的基因从重组T载体上切下，插入到原核表达载体的多克隆位点，构建重组表达质粒，将重组表达质粒转化到表达宿主菌大肠杆菌，筛选出阳性克隆菌，得工程菌；

4)工程菌经发酵、诱导、分离、纯化，得重组人胱抑素C蛋白。

6.根据权利要求5所述的重组人胱抑素C蛋白的表达方法，其特征在于：目的基因两端加入的酶切位点不相同。

7.根据权利要求5所述的重组人胱抑素C蛋白的表达方法，其特征在于：目的基因的序列内部不含有其两端加入的酶切位点。

8.根据权利要求5所述的重组人胱抑素C蛋白的表达方法，其特征在于：目的基因两端加入的酶切位点与原核表达载体多克隆位点有相同的酶切位点，且酶切顺序一致。

9.根据权利要求5～8任一项所述的重组人胱抑素C蛋白的表达方法，其特征在于：目的基因的5’端加入NdeⅠ酶切位点，3’端加入EcoRⅠ酶切位点；原核表达载体为pET-22b(+)；表达宿主菌为E.coli BL21(DE3)。