[发明专利]一种梅花染色体周年性制片方法

权利要求书

1.一种梅花染色体周年性制片方法，其特征在于，根据时间选取如下分生组织作为制片材料：

1)春季，梅花早春枝条新发茎尖；2)初夏，梅花未成熟胚，以及梅花未成熟胚组织培养所得生长点；3)夏、秋，梅花一年生实生苗顶端生长点；4)冬季，梅花休眠枝条水培所得茎尖。

2.根据权利要求1所述的制片方法，其特征在于，所述的梅花早春枝条新发茎尖，为梅花叶芽正常萌动伸长时，剥去鳞片及大叶，所取得的萌发茎尖。

3.根据权利要求1所述的制片方法，其特征在于，所述的梅花未成熟胚，为授粉后25～35天，用石锤除去梅花果实的果肉，打开果核取出种子，所取的未成熟胚。

4.根据权利要求1所述的制片方法，其特征在于，所述的梅花未成熟胚组织培养所得生长点，为以6-BA浓度是1mg/L、IBA浓度是0.2mg/L的MS培养基进行梅花组织培养，暗培养一周，胚伸长时，切取的0.5cm伸长部位作为梅花未成熟胚组织培养所得生长点。

5.根据权利要求1所述的制片方法，其特征在于，所述的梅花一年生实生苗顶端生长点，为于第一年8月初对梅花种子进行2℃低温沙藏，55-65天后梅花种子发芽，播种栽培于温室，次年4月中旬移栽至大田，同时对梅花一年生实生苗进行修剪，待分枝后，于上午切取一年生枝条顶端生长点作为梅花一年生实生苗顶端生长点。

6.根据权利要求5所述的制片方法，其特征在于，切取梅花一年生枝条顶端生长点的时间为上午9:00～11:00。

7.根据权利要求1所述的制片方法，其特征在于，所述的梅花休眠枝条水培所得茎尖，为于11月中旬取一年生枝条蜡封处理，4℃低温保存一个月后水培，一周后发芽，所取的萌发茎尖。

8.根据权利要求1-7所述的制片方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)所取制片材料用卡诺固定液低温4℃固定20h以上，作为固定后的材料待用；

(2)配制纤维素酶和果胶酶的酶溶液，纤维素酶的重量百分含量为2.0～2.5％，果胶酶的重量百分含量为2.0～2.5％；

(3)将步骤(1)中固定后的材料用步骤(2)配制的纤维素酶和果胶酶的酶溶液常温酶解，酶解时间长度90～150min，作为酶解后的材料待用；

(4)将酶解后的材料进行染色压片法制片。

9.根据权利要求8所述的制片方法，其特征在于，步骤(2)所述的纤维素酶和果胶酶的酶溶液，纤维素酶的重量百分含量为2.38％，果胶酶的重量百分含量为2.38％。

10.根据权利要求8所述的制片方法，其特征在于，步骤(3)所述用纤维素酶和果胶酶的酶溶液常温酶解，酶解温度为37℃，酶解时间长度为110min。