[发明专利]用于检测猪繁殖与呼吸综合症患猪的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测猪繁殖与呼吸综合症患猪的试剂盒。 

背景技术

猪繁殖与呼吸综合症（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS），又称为猪蓝耳病，是由PRRS病毒（PRRS virus,PRRSV）引起的猪的一种高发传染病，可引起母猪的繁殖障碍、各年龄猪发生呼吸道症状以及仔猪死亡，此外还可以导致免疫抑制从而诱发继发感染。我国于1995年首次报道了该病的发生，尤其是2006年下半年以来，我国25个省份爆发了由毒力变异的高致病性PRRSV毒株为主要病原的“猪高热病”（HP-PRRS），本病的传染性极强，一旦感染，发病猪将持续高温41℃以上并出现急性死亡；妊娠母猪流产率高达30%以上；仔猪则100%发病并伴随着50%以上的死亡率风险，给我国的养猪业造成严重的经济损失。 

PRRSV属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属，分为2个型，即欧洲型（I型，以LV株为代表）和美洲型（II型，以VR2332株为代表）。目前在我国流行的主要是II型毒株。该病毒的病毒粒子中含有一个核衣壳，核衣壳由正链RNA基因组和核衣壳蛋白(N)组成，核衣壳外边被一层囊膜包裹；病毒的囊膜含有6种病毒结构蛋白：小囊膜蛋白（E）、膜蛋白（M）以及N-糖基化蛋白GP2、GP3、GP4和GP5。M、N和GP5三种蛋白是PRRS病毒的主要结构蛋白，E、GP2、GP3和GP4是次要结构蛋白。M蛋白和GP5以二硫键相连的异源二聚体的形式存在于囊膜中，而次要结构蛋白E、GP2、GP3和GP4则可能是以非共价键结合在一起形成异源多聚体。 

目前，国内外已经建立了许多检测PRRSV的方法，包括抗原检测和抗体检测。RT-PCR法、病毒分离培养法、免疫组化法等主要是检测PRRSV抗原，但这些方法具有操作复杂，成本高，耗时长等等不足之处，不利于基层的应用和推广。间接免疫荧光（IFA）、ELISA、免疫过氧化物酶单层细胞实验以及中和实验等方法属于检测PRRSV抗体，其中ELISA操作最方便，应用最广泛。通过对当前国内外市场研究和使用的PRRSV血清抗体ELISA检测试剂盒的调查发现，主要有PRRSV全病毒、N蛋白、Gp5蛋白、Nsp7或Nsp10为包被抗原的ELISA检测试剂盒。目前针对PRRS诊断方法应用最为广泛的是美国IDEXX公司生产的间接ELISA试剂盒，它是以全病毒作为包被抗原。但是，PRRSV病毒需由细胞培养物中大量增殖，成本过高；而其他的单一蛋白作为包被抗原，则可能出现漏检感染个体，造成猪场PRRSV监控不完善，给养猪业带来不可估量的损失。 

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测猪繁殖与呼吸综合症患猪的试剂盒。 

本发明提供的融合蛋白，包括N蛋白片段和Gp5蛋白片段；所述N蛋白片段如序列表的序列4自N末端第1至122位氨基酸残基所示；所述Gp5蛋白片段如序列表的序列4自N末端第135至207位氨基酸残基所示。 

所述融合蛋白还包括位于所述N蛋白片段和所述Gp5蛋白片段之间的连接肽。所述连接肽具体如序列表的序列4自N末端第123至134位氨基酸残基所示。 

所述融合蛋白具体可如序列表的序列4或序列表序列5所示。 

编码所述融合蛋白的基因也属于本发明的保护范围。 

所述基因包括所述N蛋白片段的编码序列和所述Gp5蛋白片段的编码序列。所述基因还可包括位于N蛋白片段的编码序列和所述Gp5蛋白片段的编码序列之间的所述连接肽的编码序列。所述N蛋白片段的编码序列具体可如序列表的序列3自5’末端第1至366位核苷酸所示。所述Gp5蛋白片段的编码序列具体可如序列表的序列3自5’末端第403至621位核苷酸所示。所述连接肽的编码序列具体可如序列表的序列3自5’末端第367至402位核苷酸所示。 

所述基因具体可如序列表的序列3或序列表的序列6所示。 

含有所述基因的重组质粒、表达盒、转基因细胞系或重组菌均属于本发明的保护范围。 

所述重组质粒具体可为将序列表的序列3所示基因插入pET-28a载体的多克隆位点得到的重组质粒。所述重组质粒更具体可为将序列表的序列3所示基因插入pET-28a载体的EcoRI和XhoI酶切位点之间得到的重组质粒。 

所述重组菌具体可为将所述重组质粒导入大肠杆菌得到的重组菌。所述大肠杆菌具体可为大肠杆菌BL21。