[发明专利]鼠尾藻凝集素及制备方法

权利要求书

1. 一种鼠尾藻凝集素，其特征在于是以鼠尾藻为原料，经冻干、粉碎、浸泡、离心、硫酸铵分级，DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析而得到，其分子量为17kD。

2.根据权利要求1所述的鼠尾藻凝集素的制备方法，其特征在于按如下步骤进行：

a. 以新鲜鼠尾藻为原料，冻干、粉碎成粗粉，按质量体积（g/ml）比为1：10~20向鼠尾藻粗粉中添加含0.15mol.L^-1NaCl的PBS缓冲液，4℃~30℃浸泡16~24h，5000r/min离心30min，取上清液；

b. 在冰水浴及搅拌条件下，添加硫酸铵粉末至上清液中，使上清液中硫酸铵饱和度达65~85％，搅拌混匀后，5000r/min离心30min，收集沉淀，弃去上清；

c. 用生理盐水溶解沉淀并用生理盐水透析至无SO₄^2-后，采用1.6×20cm DEAE-52纤维素离子交换层析柱，用梯度混合仪进行线性梯度洗脱，所述梯度混合仪混合瓶中的洗脱液Ⅰ是pH 7.5的0.01mol.L^-1Tris-HCl缓冲液，所述梯度混合仪储藏瓶的梯度洗脱液Ⅱ是pH 7.5含有0.8mol.L^-1 NaCl的0.15mol.L^-1 Tris-HCl缓冲液，洗脱流速为3ml/10min，按每管3ml分管，收集23~31管的洗脱产物并浓缩；

d. 将上述浓缩的洗脱产物，上1.6×90cm Sephadex G-200凝胶过滤层析柱，洗脱液为pH7.2的0.015mol/LPBS缓冲液，流速2ml/10min，按每管2ml分管，收集第51~59管的洗脱产物，冷冻干燥。