[发明专利]拟南芥转录因子Dof1基因的原核表达载体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种转录因子基因Dof1的原核表达载体pET32a-Dof1及其在制备Dof1重组蛋白中的应用。

背景技术

Dof转录因子是植物特异性转录因子，从第一个Dof蛋白的cDNA序列在玉米中获得以来（Yanagisawa S, Izui K. 1993, J Biol Chem, 268:16028-16036），许多单子叶和双子叶植物中的Dof蛋白基因被分离，如拟南芥、烟草、南瓜、马铃薯、大麦、小麦、水稻等（Yanagisawa S. 2002, Trends Plant Sci, 12:555-560）。研究表明，Dof转录因子在植物生长发育过程中参与多种生物学过程，其中包括参与光应答和碳氮代谢、种子发育和萌发、植物激素应答、微管系统发育等多个途径。

研究发现，玉米Dof1在拟南芥（Yanagisawa S, Sheen J. Plant Cell, 1998, 10:75-89）和马铃薯中（Yanagisawa S, Izui K. J Biol Chem, 1993, 268:16028-16036; Kumar R, Taware R. Mol Biol Rep, 2009, DOI 10.1007/s 11033- 008-9436-8）过量表达可促进与碳骨架合成有关酶表达的增加，进而参与光应答基因的表达调控。此外，玉米Dof家族的一类蛋白-PBF( Prolamin box Binding Factor)还可作为储存蛋白基因的反式作用因子，对种子储藏蛋白基因的转录进行调控（Mena M, et al. Plant J, 1998, 16: 53-62）。

小麦中的Dof基因在调控光应答基因方面起了重要作用，主要涉及一些与光合以及蔗糖运输有关的基因（Tanaka MY, Takahata Y, Nakayama H, et al. Planta, 2009, DOI 10.1007/s00425- 009-0979-2）。松树的PpDof5转录因子调控树木发育过程中氨同化必需的GS基因的表达（Rueda-Lopez M, Crespillo R, Canovas FM, et al. Plant J, 2008, 56(1):73-85）。红薯的Dof蛋白基因SRF1通过负调控一个液泡反转录酶基因Ib?fruct2的表达进而影响块根的碳代谢水平（Isabel-LaMoneda I, Díaz I, Martínez M, et al. Plant J, 2003, 33:329-340）。水稻的Dof转录因子家族包括30个Dof基因，其中已知Dof3的DNA结合域可与GARE (Gibberellic Acid Response Element)结合，参与赤霉素调控谷粒萌发中糊粉层水解酶基因的表达（Park DH, Lim PO, Kim JS, et al. Plant J, 2003, 34:161~171），OsDof可能还参与病菌引起的抗氧化过程（Mou ZL, Fan WH, Dong XN, Cell, 2003, 113: 935-944）并与光周期开花调控有关（Li DJ, Yang CH, Li XB, et al. Planta, 2009, 229: 1159~1169）。