[发明专利]一种检测新布尼亚病毒抗原的ELISA试剂盒的制备和应用

说明书

1.发明领域

本发明属于生物技术领域免疫诊断范畴。根据靶标分类的不同，目前针对传染病的诊断可分为分子生物学和免疫学诊断两类。分子生物学诊断具有快速、检出限低等优点，但是对于尖端仪器的依赖、易交叉污染以及对操作人员高素质的要求等，限制了其在基层的应用和推广。免疫学诊断(亦称血清学诊断)是以抗原抗体之间特异性结合为基础，如可以通过病原体特异性抗原检测其抗体，反之亦然。传统的免疫学诊断方法包括如病毒微量中和、免疫荧光、空斑减少等，但上述实验均涉及时间过长、需要操作活病毒、只能在高等级实验室内进行等问题。与上述各类实验方法相比，基于酶联免疫吸附试验ELISA原理开发的诊断试剂，具有敏感性高特异性强、操作简便、节约时间、价格低廉和适合基层使用等优点，市场的需求量也较大。

2.发明背景

新布尼亚病毒(Novel Bunyavirus，SFTS Bunyavirus)，是发热伴血小板减少综合症(Feverwith Throbocytopenia Associated Syndrome，SFTS)的病原，为布尼亚病毒科白热病毒属的一种新型病毒，于2009年在中国首先发现，也是中国首例发现的新型病毒。患者出现以高热、血小板减少、白血球降低、多器官功能紊乱、出血等为特征的严重急性传染病，严重影响着人民的健康和生命安全。2010年中国中东部，包括安徽、江苏、湖北、河南、山东等省先后爆发多起由蜱虫叮咬而致人死亡公共卫生事件，造成社会恐慌，严重影响当地群众健康安全和经济发展。到目前为止，国内16个省发现300多病例，造成40余人死亡。经国家疾控中心、相关省疾控中心多家单位的联合攻关，现已查明引起该传染病的病原为一新型的出血热病毒，在分类学上属于布尼亚病毒科(Bunyaviridae)、白病毒属(Phlebovirus genus)，目前命名为发热伴血小板减少综合征病毒(Severe Febrile and Thrombocytopenicyndrome Virus，SFTSV)目前该病毒序列已经阐明，基于RT-PCR的检测标准已经建立，但是对SFTSV的免疫学检测试剂还未建立，使得评价该病毒感染缺乏一个对PCR结果的验证方法。也无法评估群体的既往感染水平以及疫苗的保护作用。

由于该病毒引起的是一新发传染病，临床始发症状与普通流感无异，且病人多集中在卫生医疗水平薄弱的农村地区；同时基层医疗从业人员缺乏相关鉴别诊断的培训，当前迫切需要能适应基层临床检验人员操作的、快速检测方法，便于对病人的及时救治。另外，该病的流行病学特征、传播媒介、动物感染情况等目前均处于空白状态，也急需开发操作简单、方便快捷的检测试剂，以满足疾控系统对疫区人群、动物监测工作之需求，而目前市场无相关产品供应。

3.发明内容

本发明的目的之一在于提供了一株新的，用于检测发热伴血小板减少综合征病毒的新布尼亚病毒JS-2007-001，该病毒分类命名为新布尼亚病毒(Severe feverwith thrombocytopenia syndrome virus；Novel Bunyaviridae)，其保藏号为CCTCC V201211；保藏时间为2012年3月1日；保藏单位为：中国典型培养物保藏中心；保藏地址为：武汉大学生命科学学院武汉市武昌珞珈山。

本发明的目的之二在于提供了利用上述新布尼亚病毒JS-2007-001制备检测发热伴血小板减少综合征病毒抗原的ELISA试剂盒。

本发明的优点在于，经过适应性培养、免疫原性鉴定和免疫保护作用鉴定发现，本发明中分离的JS-2007-001病毒毒种具有最佳的生长特性和适应特性，在较短时间内达到生长高峰，可稳定获得较高滴度病毒，免疫动物获得抗体水平较高，从而能开发成为一种稳定的可商业化应用的检测发热伴血小板减少综合征病毒的试剂盒。