[发明专利]苏云金芽胞杆菌无芽胞无晶体菌株、其构建方法及其应用

权利要求书

1.无晶体无芽胞菌株HD^--ΔSpoIIID，其特征是：在无芽胞突变体菌株HD-ΔSpoIIID中，缺失带有cry1Ac基因的pHT73质粒。

2.权利要求1所述的无晶体无芽胞菌株HD^--ΔSpoIIID的构建方法，包括如下步骤：

(1)将HD-ΔSpoIIID菌株接种于BP培养基，42℃，200r/min培养48小时，

(2)再接种于BP培养基，42℃，200r/min培养48小时，

(3)再接种于BP培养基，45℃，200r/min培养12小时，

(4)取菌液涂布于固体LB培养基，30℃倒置培养48小时，

(5)用得到的菌斑鉴定HD-73野生菌株中的含cry1Ac基因的大质粒pHT73的引物进行鉴定，选出含

有cry1Ac基因的pHT73质粒缺失的菌株，命名为HD^--ΔSpoIIID。

3.根据权利要求2所述的构建方法，所述含cry1Ac基因的大质粒pHT73的引物为：

T1Ac3′：5′-ATGGAAAAAGATTTATTTGAAGATG-3′，

T1Ac5′：5′-CTCTTTATTTTCAATTTTTCGAAGT-3′。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其中步骤(1)、(2)接种量为1％。

5.根据权利要求2所述的构建方法，其中步骤(3)接种量为4％。

6.权利要求1所述的无晶体无芽胞菌株HD^--ΔSpoIIID在表达Cry蛋白和构建工程菌中的应用。

7.权利要求6所述的应用，所述Cry蛋白为Cry1Ac蛋白、Cry3Ac蛋白、Cry4A蛋白、Cry8E蛋白。

8.权利要求6所述的应用，所述工程菌为HD^--ΔSpoIIIDpHTP1Ac、HD^--ΔSpoIIIDpHTP3Ac、HD^--ΔSpoIIIDpHTP4A和HD^--ΔSpoIIIDpHTP8E，其结构为在菌株HD^--ΔSpoIIID中分别转有启动子Pcry1A，Pcry3A，Pcry4A和Pcry8E与cry1Ac基因融合的表达载体pHTP1Ac、pHTP3A、pHTP4A和pHTP8E。