[发明专利]一种普梭草素的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然物质的提取技术领域，涉及一种普梭草素的制备方法。

背景技术

普梭草系藤黄科植物Psorospermum febrifugum Sprach.，具有解热功效，用于治疗皮肤溃疡病和麻风病，该植物的乙醇提取物对F-388体内试验和gKB体外试验都显示了活性。

普梭草素（Psorofebrin）是从普梭草的根中分离得到的一种呫吨酮，mp.266-268℃，分子式：C₁₉H₁₆O₇，分子量：356.33，CAS登录号为123064-36-8。现代药理研究表明，普梭草素具有细胞毒活性，对HT-29细胞有弱的细胞毒活性，ED₅₀为8.5μg/mL。

目前国内尚未见普梭草素提取分离方法的相关报道。

高速逆流色谱（High Speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC）是国际上于上世纪80年代以来在液-液分配色谱基础上发展起来的新型分离技术，其分离原理是利用样品中各组分再两相中分配系数不同，导致在螺旋柱中的移动速度不同，因而能使样品各组分按分配系数的次序，依次得到分离。它的流动相、固定相均为液体，不需要固体载体，避免了液-固色谱常会造成的固体载体对样品的不可逆吸附，可以保证样品再不损失任何一种组分的情况下得到分离，理论上样品回收率相当高；其次，它的分离效率高，可以达到几千个理论塔板数，尤其在天然产物组分分离提取中有较高的分离度，有的样品经过一次分离就可以得到一个甚至多个单体，并且分离时间也短，一般是几个小时即可完成一次分离；此外，它使用常规试剂，有广泛的液-液分配体系可供选择，体系更换方便、快捷；它的进样量大，可以从毫克到克量级，进样体积可达20ml以上，这对于样品的纯化制备显示出惊人的优势。

发明内容

本发明的目的是提供一种普梭草素的制备方法，产品普梭草素含量高，经HPLC测定含量在95%以上。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种普梭草素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A.溶剂提取：取普梭草药材粉碎，加入适量极性溶剂提取2-3次，每次1-3h，合并提取液浓缩得浸膏；

B.溶剂萃取：用非极性有机溶剂萃取，减压浓缩萃取液并回收有机溶剂，得普梭草总黄酮提取浸膏；

C.聚酰胺树脂分离：将普梭草总黄酮提取浸膏加水分散，通过聚酰胺树脂柱，用水、乙醇、甲醇、丙酮或它们的混合溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得粗品；

D.高速逆流色谱纯化：将粗品采用高速逆流色谱分离纯化制备高纯度普梭草素，所得产品含量为95%以上。

步骤A所述极性溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、丁醇中的一种。

步骤B所述非极性有机溶剂为氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯中的一种。

步骤D所述高速逆流色谱法的溶剂系统为正庚烷、乙酸乙酯、甲醇、水，其体积比为（1-2.5）：（3-4）：（2-3）：（2-3），以上相为固定相，下相为流动相，转速为800-850r/min。

本发明的优点在于：本发明采用聚酰胺柱层析和高速逆流色谱法分离纯化，具有分离效果好，高效、快速、产品纯度高等特点。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

将普梭草药材粉碎过20目筛，取20kg，加入丁醇超声提取2次，每次1h，合并提取液浓缩得浸膏，用乙酸乙酯萃取4次，减压浓缩萃取液并回收试剂，得普梭草总黄酮提取浸膏，将浸膏加水分散，通过聚酰胺树脂柱，依次用蒸馏水、30%乙醇、70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，浓缩干燥得粗品。采用高速逆流色谱仪纯化粗品，将正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水（1:3:2:2）系统置于分液漏斗中振摇，放置，分别取上相作为固定相，下相作为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满固定相，然后设置转速800r/min，将流动相以2ml/min流速泵入，待流动相从出液端流出且两相在色谱中达到平衡后，将用流动相溶解的粗品溶液注入色谱系统中，出液端采用紫外监测进行连续检测，与普梭草素标准图谱对应，连续进样，收集普梭草素流出液，旋转蒸发浓缩，真空干燥，得到普梭草素，含量为97.3%。

实施例2：