[发明专利]一株能产生除草活性物质的铜绿假单胞菌菌株及其粗毒素制备方法

权利要求书

1.一种铜绿假单胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2012年1月10日，保藏编号：CGMCCNo.5721，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

2.权利要求1所述铜绿假单胞菌菌株(编号CB-4)，其特征在于：此菌株粗毒素对马唐、反枝苋、稗草、狗尾草、虎尾草等杂草均有很强的抑制效果。

3.权利要求1所述的铜绿假单胞菌菌株(编号CB-4)粗毒素的制备方法

(1)种子液制备，培养基配方：葡萄糖-10g，蛋白胨-10g，NaCl-5g，KCl-0.1g，MgSO₄-0.1g，蒸馏水1000mL，调pH至6.5-7.2；

将按上述配方配制好的培养基倒入250mL三角瓶，每瓶100mL，121℃高压灭菌30min，冷却后在超净台内，无菌操作条件下，接种保存在-80℃甘油中的铜绿假单胞菌(CB-4菌株)，接种量1％，接种后放37℃，转速180rpm的摇床中培养24h，即为种子液；

(2)发酵罐发酵，发酵罐培养液配方：葡萄糖-1％，蛋白胨-1％，NaCl-0.5％，KCl-0.01％，MgSO₄-0.01％，pH6.5-7.2；

70L发酵罐按70％装上述培养基，装料后在120℃，0.12MPa下灭菌30分钟。冷却至30℃左右后按1％的比例接种制备好的种子液；培养温度37℃，通气量1∶1(v/vmin)，发酵至72小时完毕；

(3)将发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取48h，期间不断震荡使其充分萃取，之后分液得到乙酸乙酯相，减压浓缩至干，得到的黄绿色油膏状物质即为粗毒素。