[发明专利]一种高纯度纳豆激酶的制备方法

权利要求书

1.一种高纯度纳豆激酶的制备法，其特征在于由以下工艺步骤组成：

a、采用细菌划线或涂布分离出单一的纳豆枯草杆菌，并在固体和液体培养基上进行纯种培养，所述的固体培养基质量浓度为蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖3.5g/L、氯化钠10g/L、琼脂15g/L，pH 7.0；所述的液体培养基质量浓度为：大豆蛋白胨10g/L、葡萄糖10g/L、牛肉膏5g/L、氯化钠2g/L，pH 7.0，培养温度为35-42℃，

b、采用液体深层发酵技术进行纳豆枯草杆菌的发酵，发酵温度为38～42℃；发酵时间为30-72hr，并通过震荡、搅拌或通气的方法供氧，

c、发酵后通过离心或过滤的方法去除菌体，获得澄清的含纳豆激酶的培养液，

d、上述培养液经过柱层析的方法去除其他杂质，纳豆激酶从层析柱上洗脱，再经浓缩、干燥，然后用聚丙烯酰胺凝胶检测，产物呈一28kDa的条带，用纤维平板检测可见清晰的纤维溶解圈。

2.如权1所述的一种高纯度纳豆激酶的制备法，其特征在于步骤(a)纳豆枯草杆菌培养温度为37℃。

3.如权1所述的一种高纯度纳豆激酶的制备法，其特征在于步骤(b)纳豆枯草杆菌发酵温度为42℃。

4.权1所述的一种高纯度纳豆激酶的制备法，其特征在于纳豆枯草杆菌发酵时间为48hr或51hr。

5.权1所述的一种高纯度纳豆激酶的制备法，其特征在于柱层析方法为疏水层析或离子交换层析或先疏水层析再离子交换层析。

6.如权5所述的一种高纯度纳豆激酶的制备法，其特征在于所述的疏水层析采用疏水性树脂。

7.如权6所述的一种高纯度纳豆激酶的制备法，其特征在于所述的疏水性树脂是Phenyl琼脂糖凝胶或Butyl琼脂糖凝胶。

8.如权5所述的一种高纯度纳豆激酶的制备法，其特征在于所述的离子交换层析采用阳离子交换树脂。

9.如权8所述的一种高纯度纳豆激酶的制备法，其特征在于所述的阳离子交换树脂为CM琼脂糖凝胶或SP琼脂糖凝胶。

10.如权1所述的一种高纯度纳豆激酶的制备法，其特征在于所述的洗脱采用氯化钠溶液梯度洗脱。