[发明专利]快速检测和判断白蛋白制品分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种白蛋白制品的无损快速检测方法，特别地涉及一种采用白蛋白的特征谱段来预测白蛋白浓度并进一步鉴别白蛋白制品，特别是人血白蛋白制品的真假伪劣的分析方法。

背景技术

人血白蛋白溶液为澄清、略黏稠的液体，几乎无色，或黄色、棕黄色或绿色，源于人静脉血浆，经过一系列沉淀、离心、过滤、灭菌等步骤制备而成。该药一直有“生命制品”、“救命药”之称，主要用于治疗血容扩张不足引起的急性和重症监护病人，包括营养不良、烧伤、严重损伤、感染、大手术、出血、肾排泄过度、胰腺炎、妊娠中毒、新生儿高胆红素血症、肝硬化及肾病引起的水肿或腹水，癌症术后恢复等方面的治疗，是临床急救的一种特殊药品。其应用较为广泛，属于市场上的紧俏药品。人血白蛋白溶液的供应紧张情况在国内已持续了两年有余，如今更有愈演愈烈之势。因而有不法分子唯利是图，制售假劣人血白蛋白溶液，坑害广大患者，扰乱医药市场。

人血白蛋白溶液制假主要有两种情况：一、不含人血白蛋白；二、人血白蛋白的真实含量低于样品包装上所标示的含量。

出于基层打假经常性的大范围筛查样品的需求，需要有一些准确、快速、简便的方法。近几年来，在分析过程中不对样品造成化学的、机械的、光化学和热分解的分析手段，是分析科学领域的研究热点之一。随着化学计量学的发展，光谱法受到国内外广泛的重视：近红外光谱重叠严重，对很多药品的测定精度不够理想；红外光谱法对测试环境温湿度要求相当高，样品制作也较麻烦，检测周期较长，不能满足快速检验的要求；拉曼光谱技术具有化学分子的指纹辨识、快速、无需繁杂的样品前处理、无损检测、不受水分子干扰等优点，适用于假药的检测，可用于人血白蛋白的真假伪劣鉴别。目前各种人血白蛋白溶液质量标准均使用中国药典附录蛋白质测定法第一法，也就是传统的凯氏定氮法进行蛋白质含量测定，操作较繁琐耗时，在应用于快速检测时存在一些不足之处。有文献报导，采用拉曼光谱法对人血白蛋白溶液进行定性分析鉴别，但是至今没有对人血白蛋白进行含量测定的相关报导。采用拉曼光谱进行定量分析，需要消除测定中的不稳定性，一方面消除随机噪声、样品背景干扰、测样器件引起光谱差异等因素对校正结果产生的影响；另一方面是谱图信息的优化，对样品信息突出的光谱区域进行选择，筛选出最有效的光谱区域，提高运算效率。目前，还没有对人血白蛋白溶液的拉曼光谱定量分析的研究报道。

因此，如何在人力、试验场地、试验仪器等均有限的条件下，采用拉曼光谱仪，发展准确、易用的拉曼光谱信息处理方法，从而有效且准确地对人血白蛋白实现无损、低成本、简便、快速、易于普及推广的人血白蛋白快速检测，从而达到对人血白蛋白真伪假劣问题的及时发现和监控管理，已成为众多科研、药检人员关注的重点之一。

发明内容

为了解决本领域的上述问题，本发明提供了一种新颖的预测白蛋白浓度并进一步鉴别白蛋白制品的真假伪劣的方法，该方法对样品测得的拉曼光谱进行平滑滤波消除噪声干扰、二阶导数处理、定量回归分析，然后通过内部交叉验证法建立模型。

因此，在第一个方面，本发明提供了一种预测待测样品的白蛋白浓度的方法，该方法包括以下的步骤：

1)获取白蛋白标准品的拉曼光谱图：将n个系列浓度的白蛋白标准溶液作为定标样品，通过拉曼光谱仪获得所述n个定标样品的拉曼光谱图；

2)选取特征谱段：从步骤1)获得的n个定标样品的拉曼光谱图中选取与芳香族氨基酸苯环上C＝C对称伸缩振动相对应的拉曼峰范围作为特征谱段，所述特征谱段优选为960-1100cm^-1；

3)Savitsky-Golay(下面简称S-G)平滑处理：将从每个浓度的标准溶液的拉曼光谱图中所选取的上述特征谱段的数据进行多点(优选9～21点，更优选9～17点，最优选13～17点，可具体选择9点、13点、15点和17点，优选13点和17点，最优选17点)Savitsky-Golay平滑滤波消除噪声干扰；

4)二阶导数处理：对步骤3)获得的数据进行二阶导数处理；

5)偏最小二乘法定量(PLS)回归分析：将步骤4)获得的光谱数据中n个定标样品的光谱矩阵和浓度矩阵进行偏最小二乘法定量回归分析，并计算出每个定标样品的预测浓度；

6)交叉验证：对步骤5)中获得的每个定标样品的预测浓度通过F-检验进行交叉验证，获得在所述交叉验证中达到最优主因子数时以真实浓度为横坐标，预测浓度为纵坐标的所述特征谱段的标准曲线，由此建立白蛋白的偏最小二乘法模型；