[发明专利]黄嘌呤氧化酶抑制剂和/或超氧阴离子清除剂的筛选方法有效
| 申请号： | 201210092278.7 | 申请日： | 2012-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN103364519A | 公开（公告）日： | 2013-10-23 |
| 发明（设计）人： | 吴弢;李相坤;唐吉鹤;陶宏迅;孙天杰 | 申请（专利权）人： | 上海中医药大学 |
| 主分类号： | G01N30/90 | 分类号： | G01N30/90 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 潘诗孟 |
| 地址： | 201203 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 黄嘌呤 氧化酶 抑制剂 阴离子 清除 筛选 方法 | ||
1.一种黄嘌呤氧化酶抑制剂和/或超氧阴离子清除剂的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)酶促反应缓冲液：称取磷酸氢二钾和磷酸二氢钾，用蒸馏水配制成磷酸缓冲液；将磷酸缓冲液与乙二胺四乙酸二钠盐混合，配制成酶促反应的缓冲液；
(2)薄层板选用硅胶板，显色剂由黄嘌呤和氯化硝基四氮唑蓝组成；将待测提取物或者化合物点于硅胶板上，和/或用展开剂展开后，挥干有机溶剂，然后将薄层板在黄嘌呤氧化酶溶液中浸渍，将薄层板活化，将活化后的薄层板在显色剂中浸渍后反应，具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性物质抑制了反应的发生，在薄层板上表现为紫色背景下的白色和/或黄色斑点。
2.根据权力要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制剂和/或超氧阴离子清除剂的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)配制酶促反应缓冲液：称取磷酸氢二钾和磷酸二氢钾，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的重量配比为(7.645-10.806)∶(0.361-2.245)，加入容量瓶中，用蒸馏水定容，配制成PH＝7.1-8.0的磷酸缓冲液；将磷酸缓冲液与1-6毫摩尔/升的乙二胺四乙酸二钠盐混合，配制成酶促反应缓冲液，在2-10℃下保存；
(2)薄层板选用硅胶板，显色剂由5-10毫摩尔/升黄嘌呤和10-20毫摩尔/升氯化硝基四氮唑蓝组成；将待测提取物或者化合物点样于硅胶板上，利用展开剂展开后，挥干有机溶剂，然后将薄层板在黄嘌呤氧化酶溶液中浸渍，吹干薄层板表面液滴，将薄层板置于25-40℃水浴的封闭条件下，对黄嘌呤氧化酶进行活化，活化时间为3-20分钟；将活化后的薄层板在适量显色剂中浸渍，然后在25-40℃水浴的开放条件下反应，反应时间为3-20分钟；具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性物质抑制了反应的发生，在薄层板上表现为紫色背景下的白色斑点。
3.根据权利要求1或2所述的黄嘌呤氧化酶抑制剂和/或超氧阴离子清除剂的筛选方法，其特征在于，步骤(2)中，展开剂为石油醚、乙酸乙酯、甲醇，或前述二种以上试剂的混合物。
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