[发明专利]6-(甲巯基)嘌呤免疫原和6-(甲巯基)嘌呤检测试剂

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及6-(甲巯基)嘌呤免疫原、抗6-(甲巯基)嘌呤特异性抗体和6-(甲巯基)嘌呤检测试剂。 

背景技术

6-(甲巯基)嘌呤(6-Methylmercaptopurine，6-MMP)，其结构式如式(Ⅰ)所示。 

6-MMP是6-(巯基)嘌呤(6-Mercaptopurine，6-MP)的代谢物。临床上6-MP广泛用于多种重要疾病的治疗，包括：急性白血病、器官移植和一些自身免疫性疾病等，但此药物使用不当可产生严重的甚至可危及生命的血液毒性。Mardini^[1]建议在使用6-MP时通过测定其代谢物6-MMP在病人血液中的浓度来决定6-MP的用药剂量，该文献结果显示，当血液中的6-MMP浓度＜0.6μg/mL时，用药剂量达不到相关疗效；而当6-MMP浓度＞5.0μg/mL时，则会对肝脏造 成毒性。因此，一般需要将代谢物6-MMP的浓度控制在0.6μg/mL～5.0μg/mL之内。 

传统检验6-MMP使用的方法是高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)和液相色谱/质谱-质谱联用技术(LC/MS-MS)。这些方法操作复杂，费用高。美国专利(专利号US6946258)公开了一种6-MMP的抗体，但其设计的衍生物对6-MMP的结构改动太大，根据其专利中的衍生物很难获得特异性强和灵敏度高的抗体。 

发明内容

本发明就是为了克服现有技术存在的检测6-MMP的方法复杂的缺陷，采用6-MMP特异性抗体研制的免疫检验试剂弥补了这些缺点。本发明提供了一种检测方便、灵敏度高的检测试剂。本发明是通过以下技术方案实现的： 

本发明的一个目的在于提供一种6-MMP免疫原。 

本发明的另一个目的是提供一种6-MMP免疫原的合成方法。 

本发明的另一个目的在于提供使用本发明6-MMP免疫原制备得到的抗6-MMP特异性抗体。 

本发明的另一个目的是提供抗6-MMP特异性抗体的制备方法。 

本发明的再一个目的在于提供一种含有本发明抗6-MMP特异性抗体的检测试剂。 

本发明的6-MMP免疫原，免疫原性高，可以诱导得到高效价的抗6-MMP特异性抗体。高效价的6-MMP特异性抗体研制的免疫试剂可直接测定反应底物6-MMP。该检测方法特异性高，能够准确地确定待测样本中是否存在6-MMP， 同样可以精确地测定6-MMP的含量。与HPLC等传统方法相比，本发明提供的免疫检测试剂具有操作简单、速度快、检测结果准确等优点。 

本发明所采取的技术方案如下： 

一种6-MMP免疫原，其结构式如式(Ⅰ)所示： 

式中，R为连接基团，载体具有免疫原性。 

R可以为-(CH₂)_n-COO-、-O-(CH₂)_n-COO-、-S-(CH₂)_n-COO-或-NH-(CH₂)_n-COO-等，n是1至20之间的整数。优选R为-(CH₂)_n-COO-，n值为1至10。更优选R为-(CH₂)₅-COO-。 

载体为具有免疫原性的物质，常选用蛋白质。优选为血清蛋白，血蓝蛋白和甲状腺球蛋白，更优选为牛血清蛋白。 

当R为-(CH₂)₅-COO-时，该6-MMP免疫原的合成途径和方法如下： 

(1)6-MMP衍生物的合成： 

用10-100ml有机溶剂A溶解1.0-10.0g的6-MMP和1.0-5.0g的碳酸盐，得到溶液1；将1.0-5.0g的6-溴己酸乙脂加入到5-50ml的有机溶剂A中，得到溶液2，将溶液1和2合并进行搅拌反应。将反应后的溶液用无机酸溶液中和，经有机溶剂B萃取分离后纯化、干燥，得到白色固体状6-(甲巯基)嘌呤衍生物。 

(2)载体溶液的制备：将具有免疫原性的蛋白质100-300mg溶于10-100ml的0.2M，pH 8.5磷酸盐缓冲液中。