[发明专利]一种基于卡介菌多糖核酸的新型疫苗佐剂及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及疫苗佐剂，具体涉及来自卡介菌多糖核酸组分，可用于治疗和预防用疫苗中的佐剂。 

背景技术

佐剂是一种非特异性免疫增强物质，当与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。目前常用疫苗佐剂有氢氧化铝佐剂、短小棒状杆菌、脂多糖、细胞因子、明矾等。但是以上这些佐剂对细胞免疫作用不明显，尤其是对以细胞免疫为主的疫苗，如对高纯化的第二代重组疫苗和第三代DNA疫苗，效果甚微。现有以上这些佐剂在临床上的应用已经满足不了现代疫苗技术发展的需求。 

已有文献报道卡介菌多糖核酸，能刺激天然免疫，促进对机体细胞特异的细胞或体液免疫作用。但采用卡介菌多糖核酸做为疫苗佐剂还没有报道。 

发明内容

本发明的目的是提供一种来源于卡介菌提取物的多糖核酸疫苗佐剂及其应用，该佐剂本身具有免疫活性，与疫苗中的抗原在体内作用能诱导Th1型为主的免疫应答。 

一种疫苗佐剂，其主要成分是从卡介菌中提取的多糖和核酸，还含有残留的卡介菌菌体蛋白和质量百分含量小于10％的水分。 

所述的疫苗佐剂，其中所述的多糖的质量百分比为70％-80％。 

所述的疫苗佐剂，其中所述的核酸的质量百分比为10％-20％。 

本发明所述的疫苗佐剂在制备治疗和预防用疫苗佐剂中的应用。 

本发明的另一目的，是提供上述疫苗佐剂和抗原所制的疫苗。 

一种疫苗，其含有所述佐剂和抗原，其中抗原和佐剂比例为：1∶1-15∶1。所述的抗原为牛分枝杆菌减毒株、新城疫Lasota株、流脑病毒灭活株、伪狂犬病毒灭活株或人源VEGF因子。 

本发明所述疫苗为卡介苗、口蹄疫灭活疫苗、流感疫苗、伪狂犬病毒灭活疫苗或抗肿瘤疫苗。 

本发明以卡介菌多糖核酸作为疫苗佐剂，研制出了新型的疫苗佐剂。通过大量试验证实，该新型佐剂本身具有免疫活性，证实了其作为佐剂诱导的免疫反应为Th1型，机体产生抗体类 型以IgG2a为主。本发明所述佐剂结合疫苗使用后，能诱导体液免疫，也能诱导细胞免疫，从而发挥和加强疫苗的预防作用及治疗作用。 

本发明所述的卡介菌多糖核酸疫苗佐剂，一个重要特点就是来源于天然产物的疫苗佐剂。该疫苗佐剂包含多糖、核酸、残留的卡介菌菌体蛋白和质量百分含量小于10％的水分，其中多糖质量百分含量为70-78％，核酸质量百分含量为12-20％，残留的卡介菌菌体蛋白质量百分含量为0-0.5％，苯酚的残留量为零，杂菌数为0-20个/克。 

本发明提供的卡介菌提取产物多糖核酸，一个重要特点就是来自天然产物，其多糖含量、核酸含量可以通过紫外检测而获得。在卡介菌多糖中，构成主链的为1→6键型Glc。存在的1→4，6键型Glc，分支点残基为Glc(1→4，6)，为0.21，即每十个己糖残基中有两个分支，非还原性末端残基是1→Glc。 

通过体外实验和体内实验，对卡介菌多糖核酸作为疫苗佐剂的药效学、作用机制进行了研究。 

本发明的意义在于将卡介菌多糖核酸作为佐剂用于疫苗中，该佐剂可以与抗原协同作用，提高疫苗的药用效能。 

附图说明

图1：肌肉注射各组对哮喘小鼠Penh/NS(％)的影响： 

图2：肌肉注射各组对哮喘小鼠PC100(mg/ml)的影响： 

图3：TES、DNA、BCG，3组肿瘤大小情况； 

图4：卡介菌多糖核酸佐剂的制备工艺流程图。 

具体实施方式

通过以下具体实施例和实验结果详细介绍本发明的创新和应用意义，帮助阅读者更好的理解本发明，但不构成对本发明实施范围的限定。 

实施例一：卡介菌多糖核酸疫苗佐剂的制备 

1、工艺流程图 

工艺流程图见附图4 

2、生产工艺过程 

2.1菌种部分 

2.1.1、工作种子批的来源： 

由中国医学细菌菌种保藏管理中心分支杆菌专业实验室制备并提供，菌种为D2PB302SII甲10，保存于-40℃以下超低温冰箱中。 

2.1.2、工作种子批的接种： 

用灭菌后的注射器从工作种子批试管中抽出0.2-0.3ml注入培养基上，然后置于37-39℃恒温室培养30天左右，即第一代菌种培养成功。 

2.1.3、保种：