[发明专利]一种参芪扶正注射液HPLC指纹图谱的构建方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种参芪扶正注射液HPLC指纹图谱的构建方法，以及由此方法所得到的参芪扶正注射液HPLC标准指纹图谱，属于药物分析技术领域。

背景技术

参芪扶正注射液是以扶正补气中药党参、黄芪为原料制成的中药大输液，具有益气扶正、提高机体免疫力等作用，主要用于各类肿瘤的辅助治疗，在临床实践中证实其与抗肿瘤药物联合使用时，有减毒增效的作用。同时，也是冠心病、心绞痛、中风患者较理想的治疗药物，具有广阔的临床应用前景。

对中药注射液质量控制方法的深入研究始终是保证其稳定性和临床使用安全性的最重要的问题。在公开的200610098953.1号及200710136382.0的专利申请中均报道了有关参芪扶正注射液HPLC指纹图谱的报道。这两项专利申请公开中记载的方法的不足之处在于：（1）供试品要通过AB-8大孔树脂柱分离纯化或者用水饱和正丁醇萃取4次随后进行浓缩等步骤制备，复杂繁琐，高温浓缩步骤容易引起成分变化，影响方法的重现性。测定有紫外吸收的酚酸类成分与无紫外吸收的皂苷类成分要用同样繁琐的方法分别制备供试品溶液，方法存在耗时长，使用有机溶剂多的缺陷。（2）指纹图谱采用多达5个非线性梯度进行测定，要用同样的条件分别测定有紫外吸收的酚酸类成分与无紫外吸收的皂苷类成分，一次测定的时间长达166分钟，条件复杂、耗时太长、耗流动相多、不易重现。（3）指纹图谱测定方法全程分别紫外208nm、266nm检测和ELSD检测，得到3张图谱，色谱峰信息重叠较多，重复测定，给分析带来不便。（4）指纹图谱所提供的化学信息不够，且所提供的色谱峰归属较少，仅有毛蕊异黄酮-7-O-β-D葡萄糖苷、黄芪甲苷两个均归属于黄芪的成分得到指认，尚无指认归属于党参的色谱峰成分。

综上所述，现有公开的参芪扶正注射液指纹图谱专利具有较多缺点。

 

发明内容

本发明的目的是克服上述现有技术中的不足，对参芪扶正注射液HPLC指纹图谱进行研究，提供一种操作简便、快速、重现性好的参芪扶正注射液的HPLC指纹图谱构建方法。该方法采用样品在线前处理、简单的HPLC非线性梯度洗脱，在一个流动相系统利用紫外检测波长切换及DAD -ELSD检测器串联的方式检测，一次进样分析得到一张完整的指纹图谱，即可包涵参芪扶正注射液中各类化学成分的信息。本发明所建立的参芪扶正注射液HPLC指纹图谱能全面地反映参芪扶正注射液的整体质量特征，可依据成品、半成品的指纹图谱变化来追根溯源寻找工艺操作中的问题，该指纹图谱化学成分首次得到99%(已知峰占共有峰峰面积比例)以上的指认，可进一步运用于建立参芪扶正注射液谱效学质量控制新模式的研究，从而全面控制产品的质量。因此，新建立的参芪扶正注射液HPLC指纹图谱方法具有普遍实用性。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：这种参芪扶正注射液HPLC指纹图谱的构建方法，可采用以下步骤：

取参芪扶正注射液样品经0.45μm微孔滤膜滤过，精密吸取75μl，注入双泵双梯度高效液相色谱仪测定。色谱条件为采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，柱温30℃；以乙腈-水为流动相，梯度洗脱，流速为0.6ml/min；以紫外检测器与蒸发光散射检测器串联检测，且紫外检测波长由266nm /208nm切换的方式检测；理论塔板数按毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷峰计应不低于3000。

取腺嘌呤、5-羟甲基糠醛对照品适量，加水制成每1ml含腺嘌呤、5-羟甲基糠醛各0.01mg的混合对照品溶液；取毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、党参炔苷、黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷0.02mg、党参炔苷0.05mg、黄芪甲苷0.06mg的混合对照品溶液。对以上对照品溶液按前述方法检测得到对照品溶液的色谱图。

对样品的前处理是运用双泵双梯度高效液相色谱仪，通过阀切换系统实现样品的在线自动净化。

所述色谱柱包括以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的预柱和分析柱，通过柱切换技术，实现对参芪扶正注射液样品的自动化前处理及分析。

所述流动相的洗脱梯度如下，其中0～40分钟为指纹图谱采集及分析时间，40～60分钟为洗柱时间，记录40分钟色谱图：