[发明专利]一种用于培育转基因植物的培养基

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于培育转基因植物的培养基。

背景技术

短柄草学名二穗短柄草(Brachypodium distachyon(L.)P.Beauv)，又名Purple False Brome，起源于地中海和中东地区，属禾亚科(Pooideae)短柄草属(Brachypodieae)，在系统进化中与温带和谷类粮食作物(Temperate cereals)、禾草类植物(Meadow and Forage grasses)处于同一进化分枝。由于短柄草植株矮小(15-20cm)，基因组只有272Mb，自花授粉、生育期短(8-12周)，易栽培，近年来已经迅速发展成为一种新的温带和谷类粮食、禾草类植物的模式植物。2010年2月份国际短柄草启动委员会(The International Brachypodium Initiative)已经完成了二穗短柄草Bd21的全基因组测序分析工作(http://www.brachypodium.org)。作为研究温带和谷类粮食、禾草类植物基因功能的模式植物，高效快速的农杆菌转化系统至关重要。

国际上早在2001年就开始对短柄草的农杆菌转化进行研究，但所用基因型不同，而且平均转化效率很低(Draper，J等，2001)。2008年美国USDA Western Regional Research Center的John Vogel，以短柄草株系Bd21-3作为受体，使平均转化效率达到37％，所用诱导愈伤培养基是：LS盐，3％蔗糖，2，4-D 11.25μM，0.2％植物凝胶，然而Bd21-3在遗传背景上与Bd21有很大差异(Vogel，J等，2008)。英国John Innes Centre的Philippe Vain以测序株系Bd21建立了高效的转化体系，该体系以MS培养基为基本培养基，潮霉素为植物筛选标记，操作繁琐，而且不适合国内应用。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于培育转基因短柄草的培养基组。

本发明提供的培养基组，由愈伤诱导培养基、继代培养基、共培养培养基、筛选培养基和再生培养基组成；

所述愈伤诱导培养基是在MS基本培养基中添加2，4-D、麦芽糖、L-天冬酰胺、肌醇、水解酪蛋白、脯氨酸和盐酸硫胺素，得到愈伤诱导培养基；其中，所述2，4-D在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为2.5mg/L，所述麦芽糖在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为30mg/L，所述L-天冬酰胺在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为150mg/L，所述肌醇在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为0.2g/L，所述水解酪蛋白在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为0.5g/L，所述脯氨酸在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为700mg/L，所述盐酸硫胺素在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为1.5mg/L；

所述继代培养基是在MS基本培养基中添加2，4-D和6-BA，得到继代培养基；其中，所述2，4-D在所述继代培养基中的终浓度为2.5mg/L，所述6-BA在所述继代培养基中的终浓度为0.01mg/L，

所述共培养培养基是在MS基本培养基中添加葡萄糖和乙酰丁香酮，得到共培养培养基；其中，所述葡萄糖在所述共培养培养基中的终浓度为10g/L，所述乙酰丁香酮在所述共培养培养基中的终浓度为200μM，

所述筛选培养基是在MS基本培养基中添加巴龙霉素和特美汀，得到筛选培养基；其中，所述巴龙霉素在所述筛选培养基中的终浓度为25mg/L-50mg/L，所述特美汀在所述筛选培养基中的终浓度为125mg/L-225mg/L；

所述再生培养基是在MS基本培养基中添加细胞激动素，得到再生培养基；其中，所述细胞激动素在所述再生培养基中的终浓度为0.2mg/L。

上述培养基组中，所述筛选培养基为如下筛选培养基I或筛选培养基II：

所述筛选培养基I中，所述巴龙霉素在所述筛选培养基I中的终浓度为25mg/L，所述特美汀在所述筛选培养基I中的终浓度为225mg/L；

所述筛选培养基II中，所述巴龙霉素在所述筛选培养基II中的终浓度为50mg/L，所述特美汀在所述筛选培养基II中的终浓度为125mg/L。

上述培养基组中，各种所述培养基中均还包括凝固剂，所述凝固剂具体为琼脂，所述琼脂在所述各种培养基中的浓度均为7g/L。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述培养基组的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：