[发明专利]一种花生组培苗移栽的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及农业生物技术领域，特别涉及一种花生组培苗移栽的方法，更特别的涉及一种提高花生组培苗移栽成活率的方法。

背景技术：

花生(Arachis bypogaea L.)是世界四大油料作物之一，是我国主要的油料作物和经济作物，在国家油脂安全和农产品国际贸易中占有举足轻重的地位。我国花生种植面积占世界种植总面积的19％，居世界第二位，出口贸易占世界总量的50％，居世界主要花生出口国之首，年均总产占世界总产的41％。在国内油料作物中，花生单产、总产和出口量均居首位。随着我国油脂需求量迅猛增长，花生在农业生产中的地位显得尤为重要。但花生遗传基础狭窄，抗逆性差，易感多种病虫害。利用转基因技术可以将外源有益基因资源引入花生，以及利用离体诱变可创造花生新种质，拓宽花生遗传基础，提高栽培种花生的抗逆性及获得其他优良性状。遗传转化及离体诱变的成功与否依赖于花生组织培养高效植株再生体系的建立。研究者们利用花生不同基因型、不同外植体，通过器官发生和胚胎发生途径得到了再生植株。建立了花生高效植株再生体系，但花生再生苗的生根后，移栽成活率低，尤其是通过转基因和突变体筛选等技术得到的具有优良性状的花生再生苗，不能保证以高成活率移栽，这就严重影响了这些工作的顺利进行。目前鲜见提高花生移栽成活率的相关报道，本试验在移栽过程的各个环节，包括组培苗生根壮苗，培养基质的配制，移栽操作以及移栽后的驯化出苗，都进行了系统试验，旨在为花生转基因苗及抗性突变体植株的高成活率移栽提供有效方法。

发明内容：

本发明一方面涉及一种花生组培苗移栽方法，本发明另外一方面涉及提高花生移栽的成活率的组培苗移栽方法，为了实现本发明的目的，本发明采用如下的技术方案：

一种花生组培苗移栽方法，其特征在于包括如下步骤：

1、组培苗生根壮苗

先配制固体生根培养基：1/2MS₀(MS₀是不加激素的基本培养基)+130-160mg/L NAA(α-萘乙酸)+蔗糖15-25g/L+琼脂粉6-10g/L，pH5.6-6，高温高压灭菌，将生芽培养基中培养的花生组培苗在超净工作台上转移至生根培养基中，用透气塑料封口膜封口，放回人工气候室，光照强度1000-2000LX，每天光照培养12-16h，培养6-8天，在超净工作台上将组培瓶的封口膜换成羊皮纸封口，放回人工气候室培养6-8天，然后去掉羊皮纸，敞开瓶口，培养2.5-3.5天，准备移栽；

2、配制移栽后的营养液培养基质

选用细腻的沙子，用高压灭菌袋分装后经高温高压灭菌，或者用搪瓷盘分装后经烘箱高温灭菌，采用灭菌的沙子作为基质，配制Hoagland’s营养液，营养液中加多菌灵，加入量为0.4-0.6g/L，配制的营养液用于混合润湿沙子和沙土地中的土；

3、移栽

将培养好的组培苗从MS培养基上取出，用无菌自来水洗净花生苗根部的培养基，任选的用软毛刷轻刷一下，将根部的MS培养基洗净，将花生苗移栽至沙子培养基质中，统一喷施营养液至叶面微湿，放在人工气候室，室温，光照强度1000-2000LX，每天光照培养12-16h；

4、驯化出苗

花生苗每隔两天喷施一次营养液，保湿，20-40天后将花生苗转移入装有沙土的盆，喷施自来水，保湿，壮苗之后转入大田，常规管理。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的固体生根培养基通过如下步骤配制：

大量元素浓缩液：KNO₃ 35-4 0g/L，NH₄NO₃ 30-36g/L，KH₂PO₄ 3.0-3.8g/L，MgSO₄·7H₂O 7-8g/L，CaCl₂ 8.5-9.5g/L；

微量元素浓缩液：MnSO₄·4H₂O 2000-2400mg/L，ZnSO₄·7H₂O 800-1000mg/L，H₃BO₃ 250-400mg/L，KI 70-90mg/L，NaMoO₄·2H₂O 3-7mg/L，CuSO₄·5H₂O 2-3mg/L，CoCl₂·6H₂O 2-3mg/L；