[发明专利]厚叶岩白菜离体培养和快速繁殖的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物快繁方法技术领域，具体为厚叶岩白菜离体培养和快速繁殖。

背景技术

厚叶岩白菜（Bergenia crassifolia (Linn.) Fritsch）为虎耳草科岩白菜，属多年生常绿草本，是同属植物中形体较大种类，国内野生种仅见分布于新疆阿尔泰山海拔2000 m左右灌木丛下的岩石缝隙中，在蒙古、俄罗斯、朝鲜也有少量分布，开花极早，进人冬季，叶片呈红绿色或紫红色，花叶俱美，观赏价值高。全草含有岩白菜素，是治疗呼吸系统疾病的特效药，岩白菜素存在于我国五科九属植物中，在意大利、日本、印度等国家植物中也有发现，但为不同科属，岩白菜素得率差别很大，其中以厚叶岩白菜得率最高，约4.5%，并含有独特的缩合鞣质、熊果酚甙等物质。

自然状态下，厚叶岩白菜主要靠地下根状茎分株繁殖，繁殖率低，生长缓慢。自然结实率极低，春季播种出苗率最高也仅达22.5%，实生苗也非常细小，幼苗很难在恶劣的环境下存活。种子细小，千粒重仅为0.21g，无后熟休眠特性，成熟撒落时，原生长地的气温阻碍了种子的萌发，所以目前未实现大规模的人工栽培。

岩白菜属植物主要含有三大类物质：酚类、黄酮类以及多糖类等，酚类物质容易引起离体培养中植物材料的褐变。其根状茎粗大，长期深埋于土壤中，感染各种外源微生物机会多，而且有报道岩白菜属植物中存在众多内生真菌。植物材料褐变和内生菌引发的污染，成为岩白菜能否离体培养成功进而实现快速繁育的瓶颈所在。

国内外植物界在化学成分分析、资源开发、临床应用、栽培驯化上都有了较深的研究。随着厚叶岩白菜药用价值的拓宽和绿化用途的提升，野生资源被过度的采挖利用，野生岩白菜属植物资源日趋濒危。为兼顾植物多样性保护与资源的合理开发，我们进行了系统引种栽培驯化试验，在单株选优的基础上开展了快速繁殖技术研究，不仅有益于经济发展，保护野生资源，也是制药企业长期持续发展的必由之路，从根本上解决岩白菜属药用植物资源尖锐的供需矛盾。

发明内容

本发明目的在于：提供一种厚叶岩白菜离体培养和快速繁殖的方法，在离体条件下快速繁殖厚叶岩白菜，且生产的厚叶岩白菜种苗品质高，一致性好。

本发明解决上述技术问题所采取的技术方案包括下述步骤：取厚叶岩白菜外植体在无菌环境下，经初代培养、增殖培养、壮苗培养和生根培养获得再生植株，进行栽种，其按下列步骤进行：

所述的初代培养：选择并清洗、消毒处理带顶芽的新鲜根状茎获得起始的无菌试管苗，在无菌环境的显微镜下修切为0.2~0.5mm大小的芽点，接种到初代培养基上，进行初代培养，获得初代培养的无菌苗，所述的初代培养基为：

MS+6-BA0.15~0.25mg·L^-1+NAA0.15~0.25mg·L^-1+VC0.5~5.0mg·L^-1+蔗糖25~35g·L^-1+琼脂4~8g·L^-1；

所述的增殖培养：是将初代培养的无菌苗转入增殖培养基，诱导不定芽，该增殖培养基为：

MS+BA0.5~3.5mg·L^-1+NAA0.2~1.5mg·L^-1+VC0.5~5.0mg·L^-1+蔗糖25~35 g·L^-1+琼脂4~8 g·L^-1，诱导出丛生芽；

所述的壮苗培养：将诱导出的丛生芽分切后，转移至壮苗培养基，进行壮苗培养，获得1.5cm以上的试管苗；

所述的生根培养：将经壮苗培养生长到1.5cm以上的试管苗分切后，转移至生根培养基中，获得生根试管苗，该生根培养基为1/2MS+NAA1.5~4.5mg·L^-1+IBA0.5~2.5 mg·L^-1+ VC 0.5~5.0mg·L^-1 +蔗糖15~25g·L^-1+琼脂4~8g·L^-1；

最后，对所得的生根试管苗进行清洗，移至珍珠岩、草炭土、腐殖质的混合基质中进行栽种。

本发明选用VC做为抗褐化剂，凡是有切割植物操作的试验中，无菌水或培养基都要添加VC，保证整个流程中，褐化率比较低，不影响试验的顺利进行。采用茎尖消毒后，继续无菌修切为0.2~0.5mm大小芽点的方法，可以有效克服外源微生物和内生菌引起的植物材料污染，是保证整个快繁培养的关键步骤之一。