[发明专利]小分子诱导猪精原干细胞转变为胚胎干细胞样细胞的方法无效
| 申请号： | 201210068770.0 | 申请日： | 2012-03-16 |
| 公开（公告）号： | CN103305459A | 公开（公告）日： | 2013-09-18 |
| 发明（设计）人： | 刘林;李治国;张栋栋 | 申请（专利权）人： | 南开大学 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300071*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分子 诱导 猪精原 干细胞 转变为 胚胎 细胞 方法 | ||
1.一种小分子诱导猪精原干细胞转变为胚胎干细胞样细胞的方法，其特征在于：包括猪精原干细胞的预处理和小分子诱导猪精原干细胞向胚胎干细胞样细胞的转变两个步骤：
(1)猪精原干细胞预处理：取猪的睾丸，通过两步酶消化法和差异贴壁法获得高纯度的猪精原干细胞。
(2)小分子诱导猪精原干细胞向胚胎干细胞样细胞的转变：用含有小分子和生长因子的低血清或血清替代品的KO-DMEM培养液诱导。
2.根据权利要求1所述的小分子诱导猪精原干细胞转变为胚胎干细胞样细胞的方法，其特征在于：猪精原干细胞预处理步骤为：猪睾丸组织剪碎后，放于含10倍体积的1mg/ml Collagenase IV和10μg/mlDNase I的消化液内消化30分钟，再放于含10倍体积的1mg/ml Dispase II和10μg/ml DNase I消化30分钟。用40μm滤器进行过滤后计数。再经过2次差异贴壁后，每次4-8小时，获得纯度在90％以上的精原干细胞。
3.根据权利要求1所述的小分子诱导猪精原干细胞转变为胚胎干细胞样细胞的方法，其特征在于：小分子诱导猪精原干细胞向胚胎干细胞样细胞的转变步骤为：纯化后的猪精原干细胞在含有小分子和生长因子的低血清或血清替代品的KO-DMEM培养液8-10天。
4.根据权利要求3所述的小分子诱导猪精原干细胞转变为胚胎干细胞样细胞的方法，其特征在于：所述的小分子成分为vitamin A、forskolin、AZA和TSA，生长因子的成分为GDNF和LIF.
5.根据权利要求4所述的小分子诱导猪精原干细胞转变为胚胎干细胞样细胞的方法，其特征在于：vitamin A的浓度为1μmol/L，forskolin的浓度为10μmol/L，AZA的浓度为2.5μmol/L，TSA的浓度为0.1μmol/L，GDNF的浓度为10ng/ml，LIF的浓度为1000U/ml。
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