[发明专利]一种制备纤细薯蓣皂苷的方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备纤细薯蓣皂苷的方法，以及其制剂在抗肿瘤方面的应用，属于医药领域。 

背景技术

纤细薯蓣皂苷为一甾体皂苷类天然化合物，1954年由日本学者Tsukamoto Takeo等首先从薯蓣科薯蓣属植物纤细薯蓣(Dioscorea gracillima)中提取分离得到。之后不断有学者从薯蓣科薯蓣属、百合科重楼属、百合科闭鞘姜属、百合科黄精姜属等其它科属植物中分离得到。并对它的生理活性进行了多方面的研究，发现该化合物在抗肿瘤、抗菌、杀灭寄生虫、溶血、降血脂、抗骨质疏松、抗突变等方面都有一定的生理活性。目前已有的制备纤细薯蓣皂苷的方法基本为实验室的流程：如Tsukamoto Takeo等在Yakugaku Zasshi，1954，74：1127中的报道，采用提取、反复结晶的手段从纤细薯蓣中得到纤细薯蓣皂苷；杨崇仁等在云南植物研究，1986，8(3)：355中的报道，采用提取、萃取、反复柱层析、结晶的方法从Dracaena cambodiana的果实中得到纤细薯蓣皂苷；李伯刚等在植物学报，1986，28(4)：409中的报道，采用提取、萃取、反复柱层析、结晶的方法从黄山药中得到纤细薯蓣皂苷；庞自洁等在中草药，2008，39(4)：493中的报道，采用提取、萃取、反复柱层析的方法从盾叶薯蓣中得到纤细薯蓣皂苷；等等。这些制备方法，以研究药用植物中的化学成分为主，提取、分离流程复杂，单个化合物制备量小，对纤细薯蓣皂苷的制备而言针对性不高。如果用于纤细薯蓣皂苷的开发利用，则难以适合制备工艺的要求。另外，就纤细薯蓣皂苷的有关制剂及在防治肿瘤方面的应用，未见报道。 

发明内容

针对纤细薯蓣皂苷已报道的提取分离方法复杂、制备量小、针对性不高等方面的不足。本发明采用如下方法：称取含纤细薯蓣皂苷的药材，投入提取罐，将配制好的3-12倍于药材量的含水有机溶媒加入到提取罐中，浸泡药材30-100分钟，加热至40-100℃，回流或其它辅助方法提取1-8小时，放出提取液，照此法重复提取2-5次，合并提取液；浓缩提取液并回收有机溶媒，趁热放出残留液，放置冷却6-30小时，析出大量沉淀；减压过滤，收集沉淀，干燥粉碎得纤细薯蓣皂苷粗品；粗品以适量溶媒反复结晶，得纤细薯蓣皂苷纯品。HPLC检测，含量95％以上。该法流程相对简单、制备量可规模化、费用大大降低。 

本发明的另一目的是提供上述纤细薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷制剂在抗肿瘤方面的应用。本发明对纤细薯蓣皂苷进行了体外、体内的抗肿瘤药理试验，试验结果表明，在体外试验中，纤细薯蓣皂苷对等人肠癌细胞HCT-15、人肾癌细胞786-0、人前列腺癌细胞PC-3、人乳腺癌细胞MDA-MB-468等肿瘤细胞都有一定的抑制作用，IC50介于1-10μg/ml之间；在体内的抗肿瘤试验中，纤细薯蓣皂苷具有抑制小鼠Lewis肺癌、移植性肉瘤S180、移植性肝癌H22、人白血病K562细胞生长的作用。 

为了更好地理解本发明实质，本发明进行了体内、体外的主要药效学试验如下： 

(一)体外试验 

1.研究目的：评价受试药物受试药物对四株肿瘤细胞的增殖抑制活性。 

2.研究方法：选择四株肿瘤细胞，采用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B，SRB)蛋白染色法，初步评价化合物在细胞水平的增殖抑制活性。 

3.实验结果：采用SRB方法，以阿霉素(ADR)为阳性对照，初步评价受试药物受试药物对四株肿瘤细胞的增殖抑制作用，结果如下所示： 

(1)对人肠癌细胞HCT-15的增殖抑制作用 

筛选方法：磺酰罗丹明B(sulforhodamine B，SRB)蛋白染色法 

细胞株：人肠癌细胞(HCT-15) 

作用时间：72h 

结果评定：无效：抑制率10μg/ml＜50％  有效：抑制率10μg/ml＞50％ 

表1.受试药物在细胞水平对人肠癌细胞HCT-15的抑制率％ 

(2)对人肾癌细胞786-O的增殖抑制作用 

筛选方法：磺酰罗丹明B(sulforhodamine B，SRB)蛋白染色法 

细胞株：人肾癌细胞(786-0) 

作用时间：72h 

结果评定：无效：抑制率10μg/ml＜50％  有效：抑制率10μg/ml＞50％ 

表2.受试药物在细胞水平对人肾癌细胞786-O的抑制率％