[发明专利]鱼类受精卵定向包埋技术

说明书

技术领域

本发明涉及定向包埋技术。

背景技术

由于鱼类卵黄丰富在常规光镜切片时不能切制，再一个受光显微镜和电镜的局限性及切片厚度的影响，在选择鱼受精部分时容易将需要部分(通常指受精部分)丢失。直接制成的光镜或电镜样本，由于切片面积小，修块不准等多种原因，又容易将需要的部分修丢，造成不完整现象，直接影响观察，这样必需做大量样本才能观察到所需要的部分。

发明内容

本发明提供了鱼类受精卵定向包埋技术，目的是为了解决现有制片中受精部分易丢失及切制质量差的问题。

鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行：一、将鱼卵放入质量浓度为10％的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、透明处理和透蜡处理；

二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；

三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成2mm小块，然后采用二次定向包埋制成常规的光镜包埋块；

四、光镜包埋块采用常规切片技术进行切片，制成常规光镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。

鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行：一、将鱼卵放入质量浓度为10％的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、透明处理和透蜡处理；

二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；

三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成1mm小块，经脱腊脱苯处理后采用锇酸进行二次固定，然后用磷酸缓冲液冲洗，再用各级丙酮进行脱水处理，然后用环氧树脂#618进行定向包埋和聚合，获得电镜包埋块；

四、电镜包埋块采用电镜切片技术进行切片，制成常规电镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。

本发明的鱼类受精卵定向包埋技术，制成的光镜或电镜的样本，可保证鱼卵能够切制完整，鱼卵的受精部分可以精确的观察到所需要的内容，切制质量好，图像清晰，观察效果良好，使微观与宏观的结构有一个统一认识；同时减少了大量烦索的工作量，提高效率。

附图说明

图1为实施例1中所得完整的鲫鱼受精卵光镜片子的显微图；图2为实施例1中所得鲫鱼受精卵动物极光镜片子的显微图；图3为实施例2中所得鲫鱼受精卵极体电镜片子的显微图；图4为实施例2中所得鲫鱼受精卵两性核电镜片子的显微图。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行：

一、将鱼卵放入质量浓度为10％的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、透明处理和透蜡处理；

二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；

三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成2mm小块，然后采用二次定向包埋制成常规的光镜包埋块；

四、光镜包埋块采用常规切片技术进行切片，制成常规光镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。

本实施方式步骤一中鱼卵为所有鱼类的鱼卵。

本实施方式步骤一中脱水处理为依次采用体积浓度为70％的乙醇、体积浓度为85％的乙醇、体积浓度为75％的乙醇和体积浓度为100％的乙醇进行处理。

本实施方式步骤一中透明处理为采用体积浓度为100％的乙醇∶二甲苯＝1∶1进行处理，然后用二甲苯进行处理。

本实施方式步骤一中透蜡处理为采用二甲苯∶石蜡＝1∶1进行处理，然后用石蜡进行处理。

本实施方式步骤二中反光定位法，是将包埋块固定住放于立体显微镜下，然后调节光源，使包埋块的卵子的切面与水平面间成28～32度，使切面出现反光，观察其结构选取受精部分，然后用锋利刀片进行定位修块。

本实施方式步骤三中热刀片是指用酒精灯烧热的刀片。

具体实施方式二：本实施方式鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行：一、将鱼卵放入质量浓度为10％的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、透明处理和透蜡处理；

二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；

三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成1mm小块，经脱腊脱苯处理后采用锇酸进行二次固定，然后用磷酸缓冲液冲洗，再用各级丙酮进行脱水处理，然后用环氧树脂#618进行定向包埋和聚合，获得电镜包埋块；

四、电镜包埋块采用电镜切片技术进行切片，制成常规电镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。