[发明专利]一种海南霉素的发酵方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗生素的发酵方法，具体涉及一种采用微生物菌种发酵海南霉素的方法，属于生物医药技术领域。 

背景技术

海南霉素是白色或类白色粉末，无臭无味，英文名Hainanmycin，分子式C₄₇H₈₀O₁₅H₂O，分子量884。海南霉素是中国自主开发的单价离子载体类抗生素兽药，在防止鸡球虫感染和提高反刍动物饲料转化率上具有显著效果，为高效抗球虫药物。它对革兰氏阳性菌如杆菌、球菌有广泛的抗菌谱，对厌氧及某些植物病原菌、水稻纹枯病和油菜菌核病等真菌也有抗菌作用；对革兰氏阴性菌不显活性。南海霉素还能提高饲料转化率，增进肉鸡体重，改善鸡肉品质，促进牛、羊等反刍动物的增长，被称为长肉素。 

海南霉素是从我国海南岛土壤中分离的一种稠李链霉菌东方变种(Streptomyces padanus Var dangfangeusls)培养液中提取出的，现今制备方法是取沙土管中的孢子, 接种于斜面, 28℃培养7天, 接种2～3代斜面, 备用, 采用挖块法接种，发酵主要原料为淀粉、鱼粉。此方法孢子需在斜面上培养2-3代，难以保持菌种稳定，发酵单位无法达到生产要求。 

发明内容

本发明针对背景技术中提到的现有发酵海南霉素的不足，提供了一种海南霉素的发酵方法，该方法海南霉素发酵单位稳定，较现有发酵工艺发酵单位高，具备生产要求。 

本发明采用发酵法生产海南霉素，所用的稠李东方链霉菌（Streptomyces padanus var. dangfangeusls）SDSL-HN1109已于2011年9月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏号为CGMCC NO.5308。 

该SDSL-HN1109菌株是通过以下几个阶段选育出来的： 

一、从稠李东方链霉菌（Streptomyces padanus var. dangfangeusls）HN1菌株出发，经连续亚硝基胍诱变得到比出发菌株产量提高20 %的SDSL-HN337号高产菌株。

二、将SDSL-HN337号高产菌株经氮离子注入诱变，得到较SDSL-HN337菌株产量提高15%的SDSL-HN1109菌株，产量在5210ug/ml左右。 

本发明采用上述菌种生产海南霉素，其技术方案如下： 

一种海南霉素的发酵方法，其特征是：以稠李东方链霉菌（Streptomyces padanus var. dangfangeusls）SDSL-HN1109 CGMCC NO.5308为菌种进行发酵制备，包括以下步骤：

（1）    将冷藏的稠李东方链霉菌（Streptomyces padanus var. dangfangeusls）SDSL-HN1109 CGMCC NO.5308沙土孢子接种到斜面培养基上，在28℃下培养7天；

（2）    用无菌水洗下步骤（1）斜面培养所得的孢子，加入甘油配成孢子悬浮液，在-70℃～-80℃下保存备用；

（3）    将孢子悬浮液0.2ml接种到45-60ml种子培养基中，在28℃培养40～42小时，得种子液；

（4）    将种子液按照10～20%的接种量接种到发酵培养基中，在28℃培养90～144小时，得发酵液。

上述方法中，稠李东方链霉菌（Streptomyces padanus var. dangfangeusls）HN1109沙土孢子的制备方法是：将菌种进行斜面培养，用接种针将所得孢子刮下，送入灭菌的沙土管中，搅动沙土，使粘附在接种针上的孢子与沙土充分混合，塞紧棉塞，敲松沙土，将沙土管放入真空干燥器内，常温下保持真空度0.08～0.1Mpa连续抽干40～60分钟，然后敲松沙土，将沙土管放入盛有变色硅胶的干燥器中，置于0～8℃冰箱中保藏备用。 

上述方法中，斜面培养基组分包括：玉米淀粉1.0wt%，酵母粉1.0wt%，碳酸钙0.8wt%，氯化钠0.3wt%，黄豆饼粉0.5wt%，葡萄糖1.0wt%，蛋白胨0.1wt%，硫酸镁0.05wt%，磷酸氢二钾0.02wt%，琼脂2.0wt%，饮用水余量。在配制斜面培养基时，玉米淀粉在70～80℃糊化10分钟再与其他成分混合。