[发明专利]一种运载蜂毒肽的多肽、运载蜂毒肽的纳米颗粒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物科学和药物载体领域，特别涉及一种一种运载蜂毒肽的多肽、运载蜂毒肽的纳米颗粒及其应用。 

背景技术

蜂毒肽(melittin，GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ)是一种两亲性的α螺旋结构的多肽，是蜂毒中的主要活性成分，占其干重的40%-60%。蜂毒肽的活性很高，具有广谱的抗菌功能，能在极短的时间内发挥其作用，其效率是普通抗生素的上百倍。蜂毒肽对于细胞膜结构具有非常高效的破坏性，包括质膜以及胞内一些细胞器的膜结构。其作用机制主要有通过其两亲性的结构嵌入至膜结构中，然后在膜上打孔，致使膜结构发生破裂，膜内外环境的变化最终导致细胞的死亡；也可以通过影响细胞内介导肿瘤增殖的多条信号通路中的关键蛋白，进而引起细胞凋亡。因此，蜂毒肽在治疗肿瘤方面可以发挥很大功效。除此之外，相关研究表明蜂毒肽还可以通过抑制HIV-1基因的表达及LTR的活性来抑制艾滋病病毒的增殖；也具有抗炎镇痛的作用，镇痛强度是吗啡的40%，镇痛时间持久，抗炎活性是近氢化可的松的100多倍，不会引起免疫抑制的作用；蜂毒肽也能调节肾上腺皮质激素的释放，达到抗风湿、类风湿关节炎的作用；此外，蜂毒肽还能够引起神经内分泌反应，增强机体抗辐射作用以及防止血小板聚集，抗血栓的功效。总之，蜂毒肽在治疗各种疾病上都具有广泛的应用前景。 

然而，由于蜂毒肽自身的特性，难以将其直接应用于活体的疾病治疗中。因为蜂毒肽在注入血管后会迅速与红细胞结合，破坏细胞膜，以致产生强烈的溶血反应。而且直接将蜂毒肽应用于活体治疗，可能会对机体正 常细胞造成破坏，带来极大的毒副作用。另外，蜂毒肽在机体内的半衰期很短，代谢速度很快，并不利于临床的疾病治疗。 

纳米运载体作为一种新型的给药方式正逐渐被人们所关注。利用纳米颗粒运载蜂毒肽是一种有效避免其毒副作用的方法。然而，目前使用纳米颗粒运载蜂毒肽的报道并不多见。有些研究学者尝试使用脂质体（liposome）对蜂毒肽进行运载，而电镜结果显示装载蜂毒肽后脂质体的结构会发生极大的改变，甚至有些会被降解掉。虽然在此基础上有学者提出了更加稳定的使用脂质体运载蜂毒肽的PEG修饰的盘形颗粒，但并没有真正应用于活体治疗。还有学者使用PLGA[poly(D,L-lactide-co-glycolide acid)]颗粒实现了对蜂毒肽的高包封率的运载，但是他们同样只是进行了体外的对比实验，并没有继续深入。运载蜂毒肽的其他一些纳米颗粒同样因为其溶血性质得不到改善而被大大限制。目前，有一种基于全氟化碳（perfluocarbon,PFC）纳米颗粒能够在活体动物中稳定运输蜂毒肽，在降低了其毒副作用的同时，能够有效地发挥抗肿瘤作用。此外，此蜂毒肽纳米颗粒在修饰了靶向基团后，还可以实现肿瘤的特异性富集。但是这类PFC颗粒粒径较大，在200-300nm之间，无法穿越实体瘤内致密的网状胶原纤维的缝隙（20-40nm），难以有效地扩散到肿瘤的内部，尤其是对血管不丰富的实体瘤，很难达到预期的治疗效果。而且PFC颗粒在人体内的代谢、排泄和生物毒性还需进一步实验验证；另外作为一种温室气体材料，全氟化碳的大量应用还会带来环境的破坏。 

因此，发展一种超小径粒（<40nm）的稳定运载蜂毒肽的纳米颗粒载药方法，有效地避免蜂毒肽的溶血性和对正常细胞的毒副作用，同时具有特异性富集在病变区域并有效释放蜂毒肽的能力，将会极大地促进蜂毒肽在临床疾病治疗中的应用。 

发明内容

本发明的目的是为解决上述问题而提供了一种运载蜂毒肽的多肽及其纳米颗粒、制备方法及其应用。利用运载蜂毒肽的多肽制备得到的纳米颗粒能够有效降低蜂毒肽对于机体的毒副作用，特异性地在肿瘤等疾变区域发挥作用，可以应用于临床治疗。 

本发明所采用的技术方案是： 

一种运载蜂毒肽的多肽，所述多肽是由α螺旋多肽、连接序列和蜂毒肽以共价键的形式串连而成。 

优选地，所述α螺旋多肽的氨基酸序列为DWFKAFYDKVAEKFKEAF。 

优选地，所述连接序列的氨基酸序列为GSG。 

一种运载蜂毒肽的纳米颗粒，所述纳米颗粒由权利要求要求1所述的运载蜂毒肽的多肽、磷脂、胆固醇脂三种有机结合的方式组成。 

优选地，所述磷脂为DMPC（1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine）。 

一种运载蜂毒肽的纳米颗粒的应用，所述纳米颗粒能够有效降低蜂毒肽对于机体的毒副作用，特异性地在包括肿瘤在内的疾变区域发挥作用，可以应用于临床治疗。